[发明专利]重组酿酒酵母表达的乙肝表面抗原及其生产方法、乙肝疫苗及其生产方法

摘要

本发明公开一种重组酿酒酵母表达的乙肝表面抗原的生产方法，包括：将提取到的抗原用XAD-4柱循环去除曲通，得到去曲通抗原样液；将孔径为1000A、颗粒大小为35μm～70μm的大孔硅胶装入层析柱中，并用pH值为7.6±0.2的磷酸缓冲液平衡；将去曲通抗原样液用NaOH调pH值至7.6±0.2后，上样大孔硅胶柱；用pH值为7.2±0.2的磷酸缓冲液洗杂，在47～49℃温度下用pH值为8.7±0.2的硼酸缓冲液对洗杂后的大孔硅胶柱进行洗脱处理并收集洗脱液，对洗脱液超滤浓缩，得到澄清抗原。本发明还公开了相应的重组酿酒酵母表达的乙肝表面抗原、乙肝疫苗及其生产方法。本发明可大大降低产品污染几率、减轻人工劳动强度、节省设备投资和维修成本、减少设备占用空间，缩短生产时间。

主权项

一种重组酿酒酵母表达的乙肝表面抗原的生产方法，该方法包括有用重组酿酒酵母种子培养酵母菌的酵母培养步骤、从所述酵母菌中提取抗原的抗原提取步骤和对所述抗原进行纯化的纯化步骤，所述纯化步骤包括有依次进行的粗纯化步骤和精纯化步骤，其特征在于，在所述抗原提取步骤之后和纯化步骤之前，还包括有：去曲通步骤，将所述抗原提取步骤提取到的抗原用XAD‑4柱循环去除曲通，得到去曲通抗原样液；所述粗纯化步骤包括：装柱步骤，将孔径为1000A、颗粒大小为35μm～70μm的大孔硅胶装入层析柱中形成大孔硅胶柱后，用pH值为7.6±0.2的磷酸缓冲液对所述大孔硅胶柱进行平衡处理；上样步骤，将所述去曲通抗原样液用NaOH调pH值至7.6±0.2后，上样到所述大孔硅胶柱，其中，所述大孔硅胶柱与去曲通抗原样液上样量的体积比为1:1～1:3，上样温度为2～8℃；后处理步骤，用pH值为7.2±0.2的磷酸缓冲液对上样步骤所得的大孔硅胶柱进行洗杂后，在45～49℃温度下用pH值为8.7±0.2的硼酸缓冲液对洗杂后的大孔硅胶柱进行洗脱处理并收集洗脱液，对所述洗脱液进行超滤浓缩处理，得到澄清抗原。