[发明专利]奶牛瓣胃上皮细胞体外分离、培养以及保存和复苏方法

摘要

本发明公开了一种奶牛瓣胃上皮细胞体外分离、培养以及保存和复苏方法。分离、培养包括以下步骤：1）瓣胃组织的取得；2）培养液的制备；3）细胞分离：得原代培养的瓣胃上皮细胞；4）瓣胃上皮细胞的纯化：得纯化后的瓣胃上皮细胞；5）瓣胃上皮细胞的传代培养。奶牛瓣胃上皮细胞的保存和复苏方法，包括以下步骤：1）制备含奶牛瓣胃上皮细胞的冷冻保护液；2）将上述冷冻保护液逐步慢速降温；3）冻存细胞的解冻复苏培养。采用本发明的方法能延长奶牛瓣胃上皮细胞的保存时间。本发明是第一个公布奶牛瓣胃上皮细胞分离纯化培养法和保存复苏法的发明。本发明为研究奶牛胃肠道上皮细胞对小肽等营养物质的吸收提供了重要的实验材料和技术平台。

主权项

一种奶牛瓣胃上皮细胞体外分离方法，其特征是，包括以下步骤：1）瓣胃组织的取样选用已经与奶牛相分离的瓣胃，剪取瓣胃叶，清洗、处理后得到瓣胃组织块，备用；2）细胞分离将步骤1）所得的瓣胃组织块放入容器中，加入2%～3%（M/V）的胰蛋白酶消化液消化1 h，弃上清液，再加入胰蛋白酶消化液继续消化30 min，取上清液观察，当视野中出现大量形态结构一致的细胞时，开始收集上清液得到含有细胞的收集液，此后每15‑30 min收集一次，并向各收集液中加入血清终止消化，所得的细胞悬液经过滤和离心，得到分离的瓣胃上皮细胞。