[发明专利]一种甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法无效
| 申请号： | 201310254122.9 | 申请日： | 2013-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN103361312A | 公开（公告）日： | 2013-10-23 |
| 发明（设计）人： | 宁光;方微园;李小英;叶蕾 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属瑞金医院 |
| 主分类号： | C12N5/0786 | 分类号： | C12N5/0786 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾瑜 |
| 地址： | 200025 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明一种细胞的分离技术，特别涉及一种甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，分离步骤为：将采集到的甲状腺乳头状癌组织置于D-hanks液中、冲洗，弃D-hanks液、去除结缔组织，并将甲状腺乳头状癌组织剪成块状；在块状组织中加入Ⅱ型胶原酶，在35℃-40℃温度下消化反应1-3小时，加入含有10%胎牛血清的1640培养基终止消化反应，过滤、离心、弃上清；将细胞液用1640培养基重悬、铺板，置于5%CO2的细胞培养箱中孵育，用PBS充分洗涤；将得到的贴壁细胞在培养，收集上清液，冷冻保存。分离的巨噬细胞呈圆形，可紧密贴壁于培养皿中，CD68染色阳性，阳性率高达95%以上，证实分离巨噬细胞成功。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 甲状腺 乳头状 组织 巨噬细胞 分离 方法 | ||
【主权项】：
一种甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，其步骤包括：（1）、将采集到的甲状腺乳头状癌组织置于D‑hanks液中，并冲洗2‑4次，弃去D‑hanks液，去除甲状腺乳头状癌组织周围的结缔组织，并将甲状腺乳头状癌组织剪成1×1×1mm3的块状；（2）、在步骤（1）中的块状组织中加入Ⅱ型胶原酶，在35℃‑40℃温度下消化反应1‑3小时，然后加入含有10%胎牛血清的1640培养基终止消化反应，过滤、离心、弃上清；（3）、将步骤（2）中的细胞液用1640培养基重悬、铺板，然后置于5%CO2的细胞培养箱中孵育30‑50分钟，最后用PBS充分洗涤；（4）将步骤（3）中得到的贴壁细胞用1640培养基培养20‑28小时，收集上清液，冷冻保存。
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