[发明专利]一种甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法

权利要求书

1.一种甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，其步骤包括：

（1）、将采集到的甲状腺乳头状癌组织置于D-hanks液中，并冲洗2-4次，弃去D-hanks液，去除甲状腺乳头状癌组织周围的结缔组织，并将甲状腺乳头状癌组织剪成1×1×1mm³的块状；

（2）、在步骤（1）中的块状组织中加入Ⅱ型胶原酶，在35℃-40℃温度下消化反应1-3小时，然后加入含有10%胎牛血清的1640培养基终止消化反应，过滤、离心、弃上清；

（3）、将步骤（2）中的细胞液用1640培养基重悬、铺板，然后置于5%CO₂的细胞培养箱中孵育30-50分钟，最后用PBS充分洗涤；

（4）将步骤（3）中得到的贴壁细胞用1640培养基培养20-28小时，收集上清液，冷冻保存。

2.根据权利要求1所述的甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，其特征在于：所述步骤（2）中，块状组织与Ⅱ型胶原酶的加入比例为4-6mg：1mL。

3.根据权利要求1所述的甲状腺乳头状癌中巨噬细胞的分离方法，其特征在于：所述步骤（2）中，块状组织中加入Ⅱ型胶原酶后，在37℃温度条件下消化反应2小时。

4.根据权利要求1所述的甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，其特征在于：所述步骤（2）中，终止消化反应后，将消化液滤过70μm直径的网筛，然后把滤过液在转速为1500rpm下离心10分钟，弃上清。

5.根据权利要求1所述的甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，其特征在于：所述步骤（3）中，培养箱中的孵育时间为40分钟。

6.根据权利要求1所述的甲状腺乳头状癌组织中巨噬细胞的分离方法，其特征在于：所述步骤（4）中，贴壁细胞用1640培养基培养24小时，收集上清液，在零下80℃条件下冷冻保存。