[发明专利]一种猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法

摘要

本发明涉及一种猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法，步骤如下：对随机抽取规模场的仔猪及育肥猪血清样品，首先对采集的血清样品进行IHA（间接血凝试验）方法检测，然后对采集的血清样品进行APPELISA检测，即可检测猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌。本发明检测方法采用APP间接血凝试验与APPELISA试验的联合使用，使得猪胸膜肺炎放线杆菌的检测结果更为准确、可靠、快速、灵敏，检测结果稳定，不会出现误差，而且检测方法成本低廉，方法简单，适于基层应用，给猪的养殖及防病、抗病带来了极大的便利。

主权项

一种猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法，其特征在于：步骤如下：⑴随机抽取规模场的仔猪及育肥猪血清样品；⑵间接血凝试验检测待检猪血清中的猪胸膜肺炎放线杆菌抗体①将猪胸膜肺炎放线杆菌间接血凝试剂盒中的阴阳性对照、抗原恢复室温；②在V型110度板上进行微量间接血凝试验，200倍倍比稀释血清，做阴阳性对照，加样处理好后放入37℃恒温箱中静置1.5h后观察判断结果，猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌，检测结果即为阳性；⑶猪胸膜肺炎ELISA试剂盒检测待检猪胸膜肺炎放线杆菌抗体；①将试剂盒取出，盒内试剂恢复室温并充分摇匀；②将200倍稀释后的样本和对照加入板孔中，每孔50uL，阴阳性对照均为双份；③盖上膜，37℃维持60min；④去膜，用300uL的洗液清洗3次，最后一次在吸水纸上将平板拍干；⑤每孔加50uL酶标抗体；⑥重复步骤③；⑦重复步骤④；⑧加入50uL底物溶液，轻摇2秒；⑨将平板放入黑暗中在20‑25℃作用15min；⑩加入50uL终止液，轻摇2s，10min内在405nm下读数并记录结果，判定标准根据试剂盒使用说明书判定，猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌，检测结果即为阳性；⑷步骤⑴及步骤⑵的检测结果均为阳性，则猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌。