[发明专利]一种猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法无效
| 申请号： | 201310234942.1 | 申请日： | 2013-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN103267847A | 公开（公告）日： | 2013-08-28 |
| 发明（设计）人： | 曹杰 | 申请（专利权）人： | 天津天泽畜禽养殖专业合作社 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 王来佳 |
| 地址： | 301926 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 血清 胸膜 肺炎 放线 杆菌 检测 方法 | ||
1.一种猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法，其特征在于：步骤如下：
⑴随机抽取规模场的仔猪及育肥猪血清样品；
⑵间接血凝试验检测待检猪血清中的猪胸膜肺炎放线杆菌抗体
①将猪胸膜肺炎放线杆菌间接血凝试剂盒中的阴阳性对照、抗原恢复室温；
②在V型110度板上进行微量间接血凝试验，200倍倍比稀释血清，做阴阳性对照，加样处理好后放入37℃恒温箱中静置1.5h后观察判断结果，猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌，检测结果即为阳性；
⑶猪胸膜肺炎ELISA试剂盒检测待检猪胸膜肺炎放线杆菌抗体；
①将试剂盒取出，盒内试剂恢复室温并充分摇匀；
②将200倍稀释后的样本和对照加入板孔中，每孔50uL，阴阳性对照均为双份；
③盖上膜，37℃维持60min；
④去膜，用300uL的洗液清洗3次，最后一次在吸水纸上将平板拍干；
⑤每孔加50uL酶标抗体；
⑥重复步骤③；
⑦重复步骤④；
⑧加入50uL底物溶液，轻摇2秒；
⑨将平板放入黑暗中在20-25℃作用15min；
⑩加入50uL终止液，轻摇2s，10min内在405nm下读数并记录结果，判定标准根据试剂盒使用说明书判定，猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌，检测结果即为阳性；
⑷步骤⑴及步骤⑵的检测结果均为阳性，则猪血清中检测到猪胸膜肺炎放线杆菌。
2.根据权利要求1所述的猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤⑴中猪胸膜肺炎放线杆菌间接血凝试剂盒购自兰州兽医研究所。
3.根据权利要求1所述的猪血清中猪胸膜肺炎放线杆菌的检测方法，其特征在于：所述步骤⑵中猪胸膜肺炎ELISA试剂盒购自法国LSI公司。
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