[发明专利]表达热稳定纤维素酶基因融合体61F-EG1的毕赤酵母工程菌株无效
| 申请号： | 201310205200.6 | 申请日： | 2013-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN103255072A | 公开（公告）日： | 2013-08-21 |
| 发明（设计）人： | 李多川;李安娜;宁晓东;田洪平 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/62;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明是一种融合表达嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus61家族糖苷水解酶61f和内切葡聚糖酶eg1融合基因的毕赤酵母工程菌Pichia pastoris GS-61eg1-134。通过RT-PCR及融合PCR方法从嗜热子囊菌光孢变种T.aurantiacus var.levisporus获得糖苷水解酶基因61f和内切葡聚糖酶eg1，将其通过融合PCR得到融合基因61f-eg1，构建酵母表达载体pPIC9K/61f-eg1，导入到毕赤酵母GS115中，再从中筛选出一株高效表达融合蛋白的酵母工程菌GS-61eg1-134。该工程菌表达的酶的融合体相对于61f、eg1单独表达时的酶的活性得到明显的提高，达到10.89U/mL，比活力较内切纤维素酶EG1提高2.7倍。同时，融合蛋白表达量大，具有良好的热稳定性，可广泛用于纤维废料及其它工业领域，具有重大经济价值和社会价值。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 稳定 纤维素酶 基因 融合 61 eg1 酵母 工程 菌株 | ||
【主权项】：
一种表达嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus61家族糖苷水解酶与与内切纤维素酶融合体的酵母工程菌株，其特征在于该菌为一种毕赤酵母，通过RT‑PCR及融合PCR方法从嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus获得融合基因,将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,获得表达重组质粒pPIC9K/61f‑eg1,转化毕赤酵母GS115,从中筛出具有高纤维素酶活性的毕赤酵母工程菌株GS‑61eg1‑134，该融合蛋白纤维素酶的活性是原始酶EG的2.7倍。
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