[发明专利]玉米耐盐种质的筛选方法

摘要

玉米耐盐种质的筛选方法，步骤是：将种子消毒后在不同浓度盐溶液中浸泡12h，进行萌发和幼苗生长实验。在萌发期的胁迫实验中，每天补一次15ml对应浓度的盐溶液，待种子萌发处理4d后，每个样品留取生长一致的萌动种子，测定Na+、K+离子的含量。在幼苗生长实验中，直接将经过消毒和浸泡过的玉米种子播在含有0mmol/L、60mmol/L、140mmol/L与220mmol/L的NaC1溶液的消毒蛭石中，置于温室中进行胁迫处理，对照幼苗长到三叶一心时，测定Na+、K+离子的含量。本发明通过萌发期和幼苗生长期不同玉米自交系各个部位的Na+、K+离子含量和K+/Na+比值的变化筛选耐盐种质，能有效减少筛选工作量，缩短筛选时间，提高筛选效率和结果的准确性。

主权项

一种耐盐种质筛选方法，其特征在于包括如下步骤：（1） 收集材料：收集3个玉米自交系材料；（2） 种子精选与消毒：精选无破损、大小一致的种子，将3个玉米自交系分别用0.5%的次氯酸钠消毒10 min，用蒸馏水冲洗3‑5次，用滤纸吸干附着水，得3个自交系玉米消毒种子；（3） 盐胁迫下浸种：将3个玉米自交系消毒种子分别浸泡在0 mmol/L、60 mmol/L、140 mmol/L与220 mmol/L的NaC1溶液中12 h；得3个玉米自交系盐胁迫种子分别进入步骤4与步骤5；0 mmol/L即蒸馏水浸种处理为对照样品； （4） 种子萌发：将步骤3所得的3个玉米自交系盐胁迫种子分别置于直径为12cm的培养皿中，双层滤纸作发芽床，每皿30粒；分别加入0 mmol/L、60 mmol/L、140 mmol/L与220 mmol/L的NaC1溶液，实验设3次重复；培养皿置于培养箱中25℃暗萌发；萌发期间每天补一次15ml对应浓度的盐溶液，待种子萌发处理4 d后，每个样品留取生长一致的10粒萌动种子进入步骤6.1测定萌动种子的种皮、胚乳、胚的Na+、K+离子含量；（5） 幼苗生长：将0 mmol/L、60 mmol/L、140 mmol/L与 220 mmol/L的NaC1溶液各100 mL分别与500 g已灭菌的蛭石搅拌均匀，而后分装于15 cm×13 cm的营养钵中；将步骤3所得的3个玉米自交系盐胁迫种子，分别播在各对应盐浓度的消毒蛭石中，每钵30粒，进行胁迫处理，实验设3次重复；播种后置于植物生长室中培养，生长室的昼夜温度为25±2℃/20±2℃，每天光照12 h，光照强度为600 μmol/(s·m2)，相对湿度60‑80%；期间，每隔1 d补加1次50 ml的去离子水，每3 d补加一次对应浓度的NaC1溶液50 ml，胁迫处理10 d后，待对照样品叶片生长到三叶一心时，每个样品留取生长一致的10株盐胁迫处理幼苗进入步骤6.2测定幼苗根、茎、叶的Na+、K+离子含量；（6） 离子含量测定6.1将步骤4所得的萌动种子用60 mmol/L的NaCl溶液冲洗干净，将种皮、胚、胚乳分离，置105℃烘箱中10 min，然后于80℃下烘48 h，而后用等离子质谱测定Na+、K+离子的含量；6.2将步骤5所得的盐胁迫处理幼苗用60 mmol/L NaCl溶液冲洗干净，将根、茎、叶分离，置105℃烘箱中10 min，然后于80℃下烘48 h，用等离子质谱测定根、茎、叶中Na+、K+离子的含量；（7） 结果分析与筛选耐盐品种：对步骤6.1测得的萌动种子与步骤6.2测得的盐胁迫处理幼苗的每个样品中Na+、K+离子的含量数据，采用Excel2007软件进行数据处理，所有实验数据统计分析SPSS16.0进行处理，试验结果用平均值±标准偏差(SD)表示，采用Duncan进行差异显著性多重比较，对各处理间的差异显著性进行分析；根据萌动种子与盐胁迫处理幼苗的每个样品中Na+、K+离子的含量和K+/Na+比值的变化筛选耐盐品种。