[发明专利]玉米耐盐种质的筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于农业新品种选育技术领域，具体涉及玉米耐盐自交系的筛选方法。

技术背景

在我国0.67亿hm² 耕地中有10%为盐渍化土壤，土壤盐渍化已成为限制农作物产量进一步提高的重要环境因子之一。玉米(Zea mays)对盐分中度敏感，耐盐性相对较差。因此，深入研究玉米耐盐生理机制，筛选耐盐品种，培育具有一定耐盐能力的玉米，对充分利用盐渍化土地，提高玉米产量具有重要意义。

对玉米耐盐种质的筛选已有大量报道，孟义江等对36份玉米杂交种进行了耐盐性筛选, 筛选出耐盐性强的品种3份；徐立华等以自交系齐319，鲁原341，Lx9801，8112的幼胚为外植体，通过组培筛选，获得了耐盐突变体，为玉米抗逆育种提供了新的种质资源。

盐胁迫对玉米的主要伤害是盐离子在细胞内大量累积，导致离子毒害和离子不平衡。盐胁迫下Na⁺大量涌入胞内，不仅破坏细胞中已形成的离子平衡状态，而且影响K⁺和Ca²⁺的胞内含量和分布。Na⁺对细胞K⁺的吸收呈现明显竞争性抑制；同时高浓度Na⁺可置换质膜和细胞内膜系统所结合的Ca²⁺，膜系统完整性被破坏，膜透性增大，导致生理生化代谢紊乱。盐胁迫下细胞内离子平衡破坏的一个典型指标就是K⁺/Na⁺降低。国内外学者对作物盐胁迫下离子含量的变化进行了大量研究，初步探索出了盐胁迫下作物离子含量的变化规律。王宝山等研究证明，在NaCI胁迫下，随盐浓度和胁迫时间增加，玉米黄化幼苗组织中Na⁺含量相应增加，根中Na⁺含量为地上部分的1倍。夏阳等报道，在NaCI胁迫下，玉米Na⁺含量增高，K⁺浓度下降，K⁺/Na⁺随盐浓度升高而降低。

目前对玉米耐盐种质的筛选主要有两种途径：一是在盐胁迫处理下，通过测定株高、根长、根数、干物质积累等性状对玉米种质进行耐盐性鉴定和评价；二是在盐胁迫处理后，通过测定玉米种质的叶绿素含量、脯氨酸含量、丙二醛（MDA）、相对电导率、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性等生理生化指标来确定玉米的耐盐性。利用这些方法虽然能够筛选出耐盐玉米种质，但是会增加筛选工作量，并且测定玉米种质的生理生化指标比较复杂、实验误差较大，要得到准确可靠的耐盐种质需要多次重复实验，因此延长实验时间，降低实验效率。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种玉米耐盐种质的筛选方法；该方法简便易行，不仅可以减少实验工作量，缩短实验时间，而且能够大大提高耐盐玉米种质筛选的效率和筛选结果的准确性。

为了解决上述技术问题，本发明采取如下技术方案：一种耐盐种质筛选方法，包括如下步骤：

1. 收集材料：收集3个玉米自交系材料；

2. 种子精选与消毒：精选无破损、大小一致的种子，将3个玉米自交系分别用0.5%的次氯酸钠消毒10 min，用蒸馏水冲洗3-5次，用滤纸吸干附着水，得3个自交系玉米消毒种子；

3. 盐胁迫下浸种：将3个玉米自交系消毒种子分别浸泡在0 mmol/L、60 mmol/L、140 mmol/L与220 mmol/L的NaC1溶液中12 h；得3个玉米自交系盐胁迫种子分别进入步骤4与步骤5；0 mmol/L即蒸馏水浸种处理为对照样品； 

4. 种子萌发：将步骤3所得的3个玉米自交系盐胁迫种子分别置于直径为12cm的培养皿中，双层滤纸作发芽床，每皿30粒；分别加入0 mmol/L、60 mmol/L、140 mmol/L与220 mmol/L的NaC1溶液，实验设3次重复；培养皿置于培养箱中25℃暗萌发；萌发期间每天补一次15ml对应浓度的盐溶液，待种子萌发处理4 d后，每个样品留取生长一致的10粒萌动种子进入步骤6.1测定萌动种子的种皮、胚乳、胚的Na⁺、K⁺离子含量；