[发明专利]鸡艾美耳球虫弱毒疫苗产业化生产工艺

摘要

本发明公开了一种鸡艾美耳球虫弱毒疫苗产业化生产工艺，由以下步骤完成：含卵囊鸡粪→高效混合→接力筛分→连续流离心粗分离→饱和盐水细分→离心脱盐→卵囊消毒→孢子化→卵囊计数→卵囊配比→微囊化处理→分装。本生产工艺用于鸡艾美耳球虫弱毒多价疫苗液体和固体制剂的产业化生产，大大提高了疫苗制造效率，能够满足规模化生产的要求，有利于产品的推广应用。

主权项

1.鸡艾美耳球虫弱毒疫苗产业化生产工艺，其特征是由以下步骤完成：含卵囊鸡粪→高效混合→接力筛分→连续流离心粗分离→饱和盐水细分→离心脱盐→卵囊消毒→孢子化→卵囊计数→卵囊配比→微囊化处理→分装，具体步骤为：(1)含卵囊鸡粪高效混合，取感染鸡新鲜粪便于混合机内，加3～4倍重量清水稀释，搅拌混匀后再加入上述重量0.05～0.1％的胃蛋白酶，继续混合1～2min，静置5～6min后再加入5～7倍重量的清水，继续搅拌混匀成粪液；(2)接力筛分，筛分机分上下两层，上筛网60目、下层筛网200目，打开混合机出料口，自上层筛分机进料口一次加入所述粪液25～35升，粪液经筛分过滤后直接进入下层筛分机进行第2次筛分，第2次筛分的滤液进入储液罐，更换筛网，再加入25～35升粪液，继续进行筛分，如此直至所有粪液筛分完毕；(3)连续流离心粗分离，储液罐加料装置与离心机进料装置连接，开启离心机进料开关，离心机转速设定为4000rpm，所述筛分完毕物料由进料口进入离心机，在分离系统中受到离心力的作用，通过过滤筛网截留卵囊，上清液穿过筛网进入过滤仓由出液口排出，所述筛分完毕物料在离心过程中连续导入，卵囊沉淀留在离心仓内，上清液则不断排出，排出的上清液收集于容器中；(4)饱和盐水细分，连续离心完成后，取出离心仓，从离心仓内移出离心卵囊沉淀物称量，加5倍重的饱和盐水充分混匀，再加入离心管内以3000rpm离心10分钟；(5)离心脱盐，前一工序离心完成后取出离心管，吸取离心管表面2～3cm液体，加至另一同样体积离心管中，再加入纯水至原离心管刻度混匀，离心管装入离心机转子架，开启离心机，设定转速为3000rpm，离心15分钟，离心停止后取出离心管，弃去上清液再加入纯水至原离心管刻度，在同样设置下进行第2次离心，重复上述离心操作进行第3次离心脱盐，第3次离心脱盐后的沉淀物即为卵囊；(6)卵囊除污、消毒，取出离心管弃去上清液，沉淀物卵囊中加1％次氯酸钠溶液，混匀，作用5分钟，离心管中再加入注射用水至离心管刻度，3000rpm离心15分钟，洗去次氯酸钾溶液，重复洗涤1～2次，除污消毒后的卵囊沉淀中加入2.5％重铬酸钾水溶液，将卵囊含量调为5×10⁵/ml；(7)孢子化，上述卵囊分装于大平皿中，液面高度≤7mm，置于水平摇床载物台上，启动摇床，在确保氧气供应的前提下，至80％的卵囊完成孢子化即行停止，整个孢子化时间需24～72小时；(8)卵囊计数，计数孢子化卵囊数，计算每ml卵囊含量，孢子化卵囊2×5×10⁵/ml；(9)卵囊配比，如为多价疫苗，需按比例配制疫苗。以三价苗为例，按下表配制。鸡艾美耳球虫三价早熟弱毒苗虫株配制比例按卵囊数计算出各虫株的配液量，1000头份包装的装量为10ml/瓶，卵囊液1ml，加2.5％重铬酸钾9ml；500头份包装为5ml/瓶，卵囊液0.5ml加2.5％重铬酸钾4.5ml。(10)微囊化处理，第1步：卵囊混合将3％海藻酸钠加入配液罐内，按3％海藻酸钠10：孢子化卵囊液1，v/v比例将卵囊加入海藻酸钠中，边加边搅拌；第2步：反应成囊15～20分钟后，打开配液罐排液口，利用压力(或位差)使罐内液体均匀加入另一个装有5％氯化钙溶液的配液罐中，轻轻搅拌罐内液体，使加入液体反应形成微囊，微囊直径2.0～3.0mm，每个囊内包有卵囊约60～72个，平均66个；第3步：清洗用沉降法收集微包囊，用纯水清洗，30℃风吹干燥；第4步：计数与配制计算包囊形成数，并以玉米粉作为赋形剂，调整卵囊含量为15～16个/克，以10升孢子化卵囊液，10000羽份，1ml/羽为例，卵囊总数为1×107个，经上述配制后形成约15～16万个微包囊，可按比例加入赋形剂中，充分混匀；(11)分装，完成微囊化处理后直接分装。