[发明专利]磁性固相萃取-毛细管区带电泳测定生物样本中吡咯并喹呤醌含量的方法

摘要

磁性固相萃取-毛细管区带电泳测定生物样本中吡咯并喹呤醌含量的方法，属于生命分析技术领域。本发明采用SiO2与不同极性的吸附剂混合组成，这些吸附剂对疏水性能不同的化合物具有不同的选择性，从而能够有效的进行分离。本方法采用的毛细管电泳法加入了修饰剂β-环糊精，首次在毛细管电泳缓冲体系中加入三氟乙酸，解决了毛细管电泳图中峰的拖尾问题，峰的对称性明显好于文献报道。本方法快速、简便，首次应用磁固相萃取技术结合毛细管电泳测定牛奶中PQQ的含量。与文献方法对比，分离效率提高了6倍。

主权项

一种磁性固相萃取‑毛细管区带电泳测定生物样本中吡咯并喹呤醌含量的方法，其特征在于：（1）毛细管选择及预处理：选用未涂层的41.5cm×50μm石英毛细管柱；新毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1mol/L NaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗10‑15min；每次进样前，用蒸馏水及运行缓冲液冲洗2min；运行缓冲液及样品溶液均用0.22μm微孔针头过滤器过滤；（2）毛细管电泳分析条件：检测波长为249nm，进样方式为0.5psi压力进样，进样时间10.0秒，分离电压为25kV，毛细管柱温25℃；运行缓冲液为：pH=8.8、10mmol/L硼砂‑10mmol/Lβ‑环糊精‑质量浓度0.1%三氟乙酸的混合液；（3）生物样本中吡咯并喹呤醌PQQ的检测选用牛奶作为生物样本的典型①Fe3O4磁性纳米粒子的制备100mL1.25mM FeSO4·7H2O60℃下搅拌，用6M NaOH调pH至10，1h后磁性沉淀物分离，用去离子水冲洗，60℃真空干燥6h，得Fe3O4磁性纳米粒子；②改性的混合磁性功能纳米粒子Fe3O4‑SiO2‑Phenyl‑C8的制备将制备得到的Fe3O4磁性纳米粒子加入到含1mM四甲氧基硅烷、1mM苯基三甲氧基硅烷和1mM辛基三甲氧基硅烷混合液中，四甲氧基硅烷:苯基三甲氧基硅烷:辛基三甲氧基硅烷体积比1:1:1，加50mL含w/v0.01%吐温‑100、w/v0.02%十六烷基三甲基溴化铵的v/v12.5%甲醇和0.3mL w/v25%NH3作催化剂，120℃搅拌回流12～16h，用水、丙酮、正己烷依次清洗多次，60℃真空干燥6h，得磁性功能纳米粒子Fe3O4‑SiO2‑Phenyl‑C8；③牛奶样品去除蛋白1mL牛奶加5mL甲醇，涡旋振荡2min，4000rpm离心10min，上清液用50mL McIlvaine buffer缓冲液稀释，以备磁性固相萃取；McIlvaine buffer缓冲液为：pH7.0、0.1M柠檬酸调0.2M磷酸氢二钠溶液；④磁性固相萃取称取上述制备好的50mg磁性功能纳米粒子Fe3O4‑SiO2‑Phenyl‑C8于安普瓶中，分别用1mL的甲醇及水活化；加入步骤③处理后的牛奶样品溶液10mL， 涡旋萃取1min，甲醇解吸3min，解吸液经氮气吹干，用pH7.0、100μL磷酸缓冲液稀释，进行毛细管电泳分析。