[发明专利]一种人胎盘成肌纤维母细胞的简易分离及鉴定方法

摘要

本发明涉及建立人胎盘成肌纤维母细胞的分离及鉴定方法。把胎盘胎儿面蜕膜组织机械破碎后，通过含胶原酶I的DMEM消化液消化，分离为单个核细胞，用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养，诱导贴壁，48小时后全量换液，去除非贴壁细胞，添加新鲜培养基，待贴壁细胞形成单克隆后，分别培养各单克隆细胞，当细胞融合90%左右时，胰酶传代，即得成肌纤维母细胞。本发明采用细胞形态学，细胞周期，细胞表面标志物检测，细胞成脂、成骨分化能力检测，细胞多能干细胞因子检测及细胞结蛋白表达检测的组合方法鉴定所得成肌纤维母细胞。

主权项

一种人胎盘成肌纤维母细胞的简便分离方法，包括取胎盘，用镊子和手术刀剥除羊膜和底蜕膜上的血管组织，留取胎儿面蜕膜组织，使用75％酒精快速消毒洗涤胎儿面蜕膜组织10秒，然后以生理盐水洗涤2次，用手术刀把胎儿面蜕膜组织切割成1.5cm长、0.5cm宽的大小碎片；加入与组织碎片等体积的含1％胶原酶I的DMEM消化液，37℃消化16‑18h，消化溶液中无胎盘组织片后停止消化，离心收集单个核细胞；用含10％胎牛血清和200单位青链霉素双抗的DMEM/F12培养，在37℃、5％CO2、饱和湿度下培养48h，诱导贴壁；细胞形成单克隆后，挑取放射状的单克隆细胞单独培养，待细胞融合度达到90％时，胰酶消化，得到胎盘成肌纤维母细胞。