[发明专利]一种细胞共培养诱导干细胞体外定向分化的方法

摘要

本发明涉及一种细胞共培养诱导干细胞体外定向分化的方法，在培养皿底部装一环形垫片，先将干细胞接种在环形区域内，于培养箱内培养，待细胞贴壁后再将琼脂糖/海藻酸钠混合溶液加到该环形区域，溶液固化后，加CaCl₂溶液钙化，再加入壳聚糖溶液反应，在干细胞上形成一层琼脂糖/海藻酸钠/壳聚糖平板复合凝胶。在复合凝胶表面接种诱导细胞。本发明诱导细胞和干细胞共培养可模拟体内细胞之间及细胞和可溶性因子之间的相互作用，多糖基的琼脂糖/海藻酸钠/壳聚糖平板复合凝胶则可模拟体内细胞外基质，其刚度和厚度可调控干细胞的定向分化，同时实现了干细胞和诱导细胞的隔离共培养，使得分化细胞容易收获，将在再生医学应用中发挥重要作用。

主权项

一种细胞共培养诱导干细胞体外定向分化的方法，其特征在于：在培养皿底部装一环形垫片，先将干细胞接种在环形垫片所形成的环形区域之内，置于培养箱内培养，待细胞贴壁后再将琼脂糖/海藻酸钠混合溶液加到该环形区域，使混合溶液液面高度超过垫片厚度大于或等于2mm；之后于环形垫片上平铺一个玻璃板，将玻璃板紧密压在垫片之上，待环形垫片内的混合溶液固化后，揭去玻璃板，加入CaCl₂溶液进行钙化，之后加入壳聚糖溶液进行反应，从而在干细胞之上形成了一层琼脂糖/海藻酸钠/壳聚糖平板复合凝胶；然后在平板复合凝胶表面接种诱导细胞，从而在同一个培养体系中实现了干细胞和诱导细胞的非接触共培养，通过改变琼脂糖/海藻酸钠混合溶液中琼脂糖的质量浓度以及环形垫片的厚度可改变平板复合凝胶的刚度、厚度以及诱导细胞分泌的可溶性因子在复合凝胶中的浓度，进而调控干细胞的体外定向分化。