[发明专利]一种复合转氨酶校准物质的制备方法

摘要

一种复合转氨酶校准物质的制备方法，该制备方法包括如下步骤：1）高纯度酶原料的制备、纯化及测定；2）基质物质的制备与分析，包括如下：2.1基础性血清基质物质制备；2.2基质物质A的成分分析；2.3根据分析结果对重要的组成成分浓度进行调节，得到血清类似物B；2.4以渗透压调节剂调节血清类似物B的渗透压，使其成为等渗溶液，得到与血清渗透压相同的基质物质C；2.5根据ALT、AST的反应性质以及影响因素，加入两种酶的不同浓度的稳定剂，确定为候选校准物质D、E；2.6根据以上结果确定不同的基质物质，并添加为终浓度为80IU/L左右的AST、ALT混合物作为校准物质的候选物F、G；选择稳定性及互通性均符合要求的为最终的转氨酶复合校准物质。

主权项

一种复合转氨酶校准物质的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：1）．高纯度酶原料的制备、纯化及测定，以已克隆的ALT、AST基因表达载体表达至大肠杆菌的工程菌后，以ALT、AST的粗酶原料，经硫酸铵分级盐析，透析，柱层析等步骤，得到高纯度的ALT和AST纯品；以纯化的ALT和AST为样品，用常规的生物化学方法测定血清中常见的其他酶含量，确保纯化的两种转氨酶中，基本无其他杂酶存在，对ALT与AST的活力测定无影响；2）．基质物质的制备与分析，包括如下：2.1基础性血清基质物质制备，（1）以正常人血清为原料，选择健康献血志愿者样本，筛选并收集经过通过艾滋、梅毒、乙肝、丙肝指标的检测符合要求的血清样本，选择转氨酶在正常值范围内的样本，作为基质物质制备的原料；（2）将已经筛选的血清进行：稳定性维持‑‑‑去颗粒‑‑‑去脂‑‑‑去浊等几个步骤确定为基础性血清基质物质A；2.2基质物质A的成分分析：用全自动生化分析仪对基础性血清基质物质A进行分析；2.3根据分析结果对重要的组成成分浓度进行调节，其中主要为蛋白质浓度，以及离子浓度，尽量做到与正常血清一致才可，得到血清类似物B；其中目标酶浓度为正常酶浓度的2‑3倍左右；2.4渗透压调节：以渗透压调节剂调节血清类似物B的渗透压，使其成为等渗溶液，得到与血清渗透压相同的基质物质C；2.5适量ALT,AST稳定剂：根据ALT、AST的反应性质以及影响因素，加入两种酶的不同浓度的稳定剂，确定为候选校准物质D、E；2.6候选校准物稳定性和互通性分析：根据以上结果确定不同的基质物质，并添加为终浓度为80IU/L左右的AST、ALT混合物作为校准物质的候选物F、G；选择稳定性及互通性均符合要求的为最终的转氨酶复合校准物质。