[发明专利]一种动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的测定方法

摘要

本发明涉及一种动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的测定方法。该方法将高效液相色谱-串联质谱联用技术应用于动物血浆中氢溴酸槟榔碱的含量测定，以β-蒎烯为内标，能准确测定动物血浆中氢溴酸槟榔碱的含量。本发明专属性强，用快速、准确、灵敏的高效液相色谱-串联质谱联用法进行动物血浆中氢溴酸槟榔碱的含量测定，分离效果好，方法线性、稳定性、重现性、回收率试验均达较好的技术要求，为该药物在动物体内的药物代谢动力学和生物等效性研究奠定了方法学基础。

主权项

一种动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的测定方法，其步骤是：a、取动物空腹静脉空白血浆，加入氢溴酸槟榔碱标准品溶液、内标溶液，涡旋混合，加0.1M的AgNO₃, 涡旋30‑40s，加入NaCl，涡旋2‑3min，加石油醚，涡旋2‑3min，离心30‑40min，分离有机层置于另一离心管中，40℃水浴中氮气吹干，加超纯水溶解残渣，得标准血浆溶液，过0.45µm或0.22µm微孔滤膜，得标准血浆溶液，待测；b、取动物口服给予氢溴酸槟榔碱后的血浆，加入内标溶液，涡旋混合，加0.1M的AgNO₃, 涡旋30‑40s，加入NaCl，涡旋2‑2.5min，加石油醚，涡旋2‑2.5min，离心30‑40min，分离有机层置于另一离心管中，40‑50℃水浴中氮气吹干，加超纯水溶解残渣，过0.45µm或0.22µm微孔滤膜，得供试品溶液，待测；c、高效液相色谱‑串联质谱联用分别测定a、b步骤得到的标准血浆溶液和供试品溶液，测定的条件是用碳十八烷基键合硅胶固定相色谱柱，流动相乙腈与pH为4的甲酸铵水溶液比值为8∶92；流速0.4mL·min^‑1；电喷雾ESI源；喷雾电压Is为4kv；雾化温度：350℃；雾化气流量：l1 L/min；碰撞气流量：10 L·min^‑1；毛细管出口端电压：50v；碰撞能量：20v；deta EMV+：180v；检测方式为正离子多反应监测(MRM)，用于定量分析的槟榔碱母／子离子对为m/z 156.2— 53.0；d．将a、b步骤得到的标准血浆溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱‑串联质谱仪进行检测，得到总离子流图和质谱图，测定峰面积，以槟榔碱和内标的峰面积比（Y）对血浆中槟榔碱浓度（X）进行线性回归，得线性关系和回归方程，计算待测物浓度。