[发明专利]一种动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的测定方法

说明书

 

技术领域

本发明属于药物分析领域，涉及一种定量测定动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的方法。

 

背景技术

[0002] 槟榔碱是中药槟榔中的活性成分之一，在兽医临床上主要用于治疗绦虫、牛前胃迟缓，以及马属动物胃扩张、大肠阻塞、肠麻痹等畜禽病。另外，利用槟榔碱的灭钉螺协同作用，可显著降低化学灭螺药的投药量，与此减少了对环境造成的污染。由于槟榔碱应用于动物具有明显的副作用，在重要的经济动物及宠物上的使用受到了限制。槟榔碱其氢溴酸盐有良好的促进胃肠运动作用和驱虫作用，氢溴酸槟榔碱对多种寄生虫有驱除作用，可以代替目前临床上常用的传统产品，尤其对犬绦虫驱虫效果能达到100%，临床效果显著，有广阔的推广应用前景，属高效、安全、污染少、残留小、价廉、使用方便的农业投入品，有利于解决当前畜牧养殖业中寄生虫病的防治问题。由于氢溴酸槟榔碱紫外最大吸收波长215nm，属于末端吸收，紫外吸收很弱，高效阳离子交换色谱法和高效液相色谱-紫外检测法灵敏度不高，且目前无动物血浆中氢溴酸槟榔碱检测方法的报道。为了解决动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量测定问题，需在分析检测技术中寻求突破，以提高检测的灵敏度和准确性。

HPLC—MS/MS（液相色谱-串联质谱）联用技术是当前比较新颖的技术，因其结合了液相色谱的高效分离能力和质谱的准确定性能力，近年来成为最可靠实用的分析手段。该分析技术需样量少、检测限低，尤其适用于药物在机体代谢等因素的作用下所产生的分解物或代谢物的结构研究和量的变化。

发明内容

鉴于上述，本发明的目的在于提供一种检测动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的测定方法。该方法将高效液相色谱-串联质谱联用技术应用于动物血浆中氢溴酸槟榔碱的含量测定，以β-蒎烯为内标，能准确测定动物血浆中氢溴酸槟榔碱的含量。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：

一种动物血浆中氢溴酸槟榔碱含量的测定方法，其步骤是：

a、取空腹动物静脉空白血浆，加入氢溴酸槟榔碱标准品溶液、内标溶液，涡旋混合，加0.1M的AgNO₃, 涡旋30-40s，加入NaCl，涡旋2-3min，加石油醚，涡旋2-3min，离心30-40min，分离有机层置于另一离心管中，40℃水浴中氮气吹干，加超纯水溶解残渣，得标准血浆溶液，过0.45μm或0.22μm微孔滤膜，得标准血浆溶液，待测；

b、取口服给药后的动物血浆，加入内标溶液，涡旋混合，加0.1M的AgNO₃, 涡旋30-40s，加入NaCl，涡旋2-2.5min，加石油醚，涡旋2-2.5min，离心30-40min，分离有机层置于另一离心管中，40-50℃水浴中氮气吹干，加超纯水溶解残渣，过0.45μm或0.22μm微孔滤膜，得供试品溶液，待测；

c、高效液相色谱-串联质谱联用分别测定a、b步骤得到的标准血浆溶液和供试品溶液，测定的条件是用碳十八烷基键合硅胶固定相色谱柱，流动相乙腈与pH为4的甲酸铵水溶液比值为8∶92；流速0.4mL·min^-1；电喷雾ESI源；喷雾电压Is为4kv；雾化温度：350℃；雾化气流量：l1 L/min；碰撞气流量：10 L·min^-1；毛细管出口端电压：50v；碰撞能量：20v；deta EMV+：180v；检测方式为正离子多反应监测(MRM)，用于定量分析的槟榔碱母／子离子对为m/z 156.2— 53.0； 

d．将a、b步骤得到的标准血浆溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，得到总离子流图和质谱图，测定峰面积，以槟榔碱和内标的峰面积比（Y）对血浆中槟榔碱浓度（X）进行线性回归，得线性关系和回归方程，计算待测物浓度。

上述氢溴酸槟榔碱标准品溶液、内标溶液分别为精密称取氢溴酸槟榔碱标准品适量，用水溶解并定容得到氢溴酸槟榔碱标准品溶液；精密称取β-蒎烯适量，用无水乙醇溶解并定容得到内标溶液。

上述所述动物可为犬等肉食兽和禽类等。

本发明的优点：

1、本发明样品处理方法简便易操作，方法回收率在95%左右，RSD(%)小于3%，满足分析检测要求。