[发明专利]安全测序系统

摘要

存在于小部分DNA模板中的突变的识别对生物学研究的几个领域的发展是至关重要的。虽然大量平行测序仪器基本上非常适合该任务，但是这样的仪器中的差错率通常太高以至于不允许稀有变体的确信识别。我们这里描述了用于该目的的可大大增加大量平行测序仪器灵敏度的方法。该方法——称作“安全测序系统”——的一个实例包括（i）给每个模板分子分配独特识别符（UID）；（ii）扩增每个独特标记的模板分子以产生UID‑家族；和（iii）扩增产物的丰余测序。如果它们的≥95%含有相同的突变，那么具有相同UID的PCR片段是真正的突变体（“超突变体”）。我们显示用于测定聚合酶保真度的该方法的实用性、体外合成的寡核苷酸的准确度、和正常细胞的核和线粒体基因组中的突变流行。

主权项

1.识别核酸序列中的突变的方法，包括：将独特识别符(UID)核酸序列与多个分析物核酸片段中每个的第一末端连接以形成独特识别的分析物核酸片段；丰余地测定独特识别的分析物核酸片段的所述核苷酸序列，其中测定的共享UID的核苷酸序列形成成员家族；当所述家族成员的至少50％含有所述序列时，将核苷酸序列识别为准确代表分析物核酸片段；和当准确代表所述分析物核酸片段的所述核苷酸序列不同于预期序列时识别突变，其中所述方法不用于诊断目的。