[发明专利]嗜热长链烷醇醇脱氢酶及其晶体结构

摘要

本发明涉及一株嗜热脱氮芽孢杆菌正烷烃末端降解途径中的嗜热长链烷醇醇脱氢酶的晶体结构。本发明利用大肠杆菌E.coli异源表达该醇脱氢酶。通过蛋白质纯化方法获得该酶的纯品。利用悬滴结晶法得到该酶适宜衍射的晶体。利用X射线衍射方法对该酶的晶体结构进行解析。结果表明，一个亚基中含有两个结构域，其被一个裂缝隔开。N-端结构域含有一对类似于罗斯曼折叠的α/β折叠。该结构域含有一个NAD⁺辅酶结合位点。C-端结构域含有一个脱氢奎尼酸盐合成酶类似的α结构域布局。一个金属铁离子结合到C-端结构域，并暴露于中间裂缝。这些结果能全方位反应该酶的空间构象，为进一步研究醇脱氢酶的结构与功能之间的关系、提高酶的降解活性提供理论上的指导。

主权项

1.一株嗜热脱氮芽孢杆菌内的嗜热长链烷醇醇脱氢酶，其特征在于该嗜热长链烷醇醇脱氢酶的晶体结构如下：其空间群为C222₁，晶胞参数为α=β=γ=90°；其为二聚体，一个亚基中含有两个结构域，这两个结构域被一个裂缝隔开；N-端结构域含有一对罗斯曼折叠类似的α/β折叠，其中包含β折叠1-5和β折叠8，α螺旋1-4位于侧面，N-端结构域含有一个NAD⁺辅酶结合位点；C-端结构域含有一个脱氢奎尼酸盐合成酶类似的α结构域布局，其由9个α螺旋排成了一个螺旋束，一个金属铁离子结合到C-端结构域，并暴露于中间裂缝，该金属离子处于由四个严格保守的残基Asp194、His198、His261和His267所构成的金字塔形式的氢键网络之中。