[发明专利]一种诱导间充质干细胞定向分化为成骨细胞的方法

摘要

本发明涉及一种使用具有半通透型支架隔离系统的培养小室，定向诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的方法，使用Transwell支架培养系统，在嵌套内室接种MSCs，在外室接种成骨细胞，通过控制两种细胞的合理比例，以及适当时间加入特定的细胞因子，快速的诱导MSCs分化为成骨细胞。

主权项

一种成骨细胞的定向诱导方法，所述方法包括如下步骤：步骤(1)、MSCs细胞的获取；步骤(2)、诱导用成骨细胞的获取；步骤(3)、定向诱导MSC细胞为成骨细胞：选用聚碳酯膜(PC)Transwell系统，Transwell系统的孔径0.4～3.0μm，优选3.0μm，Transwell系统可以是适配96孔板、48孔板、24孔板、12孔板或6孔板的系统，优选为适配6孔板的24mm直径的Transwell系统，接种前先用培养基DMEM含10％胎牛血清(FCS)将小室浸润37℃、1h；将上述步骤(1)获得的P3代MSCs细胞接种于Transwell嵌套内，接种细胞量为0.05～10x104cell/孔，接种密度1～3x105cell/ml；将上述步骤(2)获得的成骨细胞接种于作为底层细胞外室，接种细胞量为0.05～10x104cell/孔，MSCs与成骨细胞接种比例为MSCs∶成骨细胞＝3∶2～10∶1，优选为MSCs∶成骨细胞＝4∶1；初始诱导培养基为DMEM(含10％FCS)，培养温度37℃，CO25％，在初始诱导培养基培养第1～7天时，优选为第3天时，向初始诱导培养基中加入成纤维细胞生长因子(FGF)，FGF浓度为1～100pg/ml，优选10pg/ml；步骤(4)、继续培养至第8～12天，优选为第10天，收集Transwell内室的细胞，该细胞即为由MSCs诱导成的成骨细胞，根据需要，进行鉴定。