[发明专利]一种电致化学发光细菌传感方法及多功能探针

摘要

本发明属于电致化学发光技术领域，特别涉及一种电致化学发光细菌传感方法及多功能探针。本发明在纳米金粒子上富集修饰葡萄糖氧化酶，构建一种多功能探针，利用电致化学发光的方法检测细菌。该探针上的葡萄糖氧化酶具有识别与催化双重功能，首先，葡萄糖氧化酶是一种糖蛋白，其携带的寡糖链可以与凝集素特异性识别结合，而且葡萄糖氧化酶能够催化葡萄糖氧化产生过氧化氢，过氧化氢能够促进鲁米诺的电致化学发光；另外，比表面积较大的金纳米粒子一方面起到了富集酶的作用，另一方面其自身也能催化鲁米诺发光。因此，利用本发明可以构建一种快速、简便、可靠、廉价且灵敏度高的方法用于细菌的检测。

主权项

一种电致化学发光细菌传感方法，其特征在于，具体步骤如下：a. 探针的制备：取3毫升浓度为1.87×10‑9摩尔每升的纳米金溶液，然后加入0.05~5毫克葡萄糖氧化酶，室温下搅拌24小时；然后在10000转每分钟的转速下离心10~20分钟并用去离子水洗涤，最后用0.1~6毫升，pH为7.2~7.4，浓度为0.01摩尔每升的无菌磷酸盐缓冲液分散，即可得表面修饰葡萄糖氧化酶的金纳米粒子探针溶液；b. 金电极的处理与组装：用pH为7.2~7.4，浓度为0.01摩尔每升的无菌磷酸盐缓冲液将伴刀豆蛋白A凝集素配制成浓度为0.5~2毫克每毫升的溶液；取50~100微升配制好的伴刀豆蛋白A凝集素溶液，分别加入各5微升浓度为10~20毫摩尔每升的氯化钙和氯化锰溶液，二者的物质的量比为1:1，将活化处理好后的金电极表面浸泡在伴刀豆蛋白A凝集素溶液中，静置修饰14小时；然后将金电极取出，用pH为7.2~7.4，浓度为0.01摩尔每升的无菌磷酸盐缓冲液洗涤后再放入50~100微升浓度为0.5~2毫克每毫升的牛血清蛋白组分五溶液中封闭，静置1小时；接着将金电极取出，用pH为7.2~7.4，浓度为0.01摩尔每升的磷酸盐缓冲液洗涤；取5~10微升的细菌分散液滴加在金电极表面，室温下浸泡1~2小时；用pH为7.2~7.4，浓度为0.01摩尔每升的无菌磷酸盐缓冲液洗涤后，再将金电极浸泡在50~100微升配制好的金纳米粒子探针溶液中，在室温下反应0.5~2小时；c. 电致化学发光检测用pH为6.0~11.0，浓度为0.1摩尔每升的磷酸盐缓冲液缓冲溶液配制含100~500微摩尔每升的鲁米诺和0.05~1摩尔每升的葡萄糖的电解质溶液；往小 烧杯中加入2毫升所配置电解质溶液，将组装好的金电极与铂对电极和银‑氯化银参比电极构建成三电极体系，然后用电致化学发光的方法进行检测；扫描电压范围为0~0.6伏，扫速为100毫伏每秒，光电倍增管电压为600伏；或按照上述用料比例、步骤的制备及检测方法。