[发明专利](3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法

摘要

一种(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以(S)-6-氯-5-羰基-3-羟基己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和氢供体的存在下发生还原反应生成(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯，所述的生物催化剂为重组酮还原酶，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH，所述的氢供体为异丙醇，所述的还原反应在pH为6.0~9.0的水相缓冲液中进行。本发明方法通过采用重组的酮还原酶，避免了因添加辅助的葡萄糖脱氢酶和葡萄糖而导致的使酶失活和产品提取困难等问题；并且采用改进的工艺，使得反应条件温和，反应效率提高，操作简便。

主权项

一种(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯的生物制备方法，其以(S)‑6‑氯‑5‑羰基‑3‑羟基己酸叔丁酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子和氢供体的存在下发生还原反应生成(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯，其特征在于：所述的生物催化剂为重组酮还原酶，所述的重组酮还原酶的制备方法为：将含有酮还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含卡纳霉素抗性的液体LB培养基中，于35~40℃下摇床活化8~12小时，将活化后得到的培养物接种到含卡纳霉素抗性的液体LB培养基中，于35~40℃下摇床扩大培养，培养至OD600值达到0.6~0.8时，加入诱导剂，于25~33℃下继续培养8~12小时，离心，收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰水浴中超声破碎8~12分钟，再离心，将上清液预冻至温度降至‑10~‑25℃，然后再冻干24~48小时，即得冻干粉状的重组酮还原酶，所述的重组酮还原酶能将异丙醇转化为丙酮，所述的辅因子为NAD/NADH或NADP/NADPH，所述的氢供体为异丙醇，所述的还原反应在pH为6.0~9.0的水相缓冲液中进行。