[发明专利]一种以珙桐叶片为外植体的组织培养获得珙桐再生苗的方法

摘要

一种以珙桐叶片为外植体的组织培养获得珙桐再生苗的方法，步骤如下：（1）珙桐叶片愈伤组织获得；（2）愈伤组织增殖；（3）诱导丛生芽；（4）丛生芽增殖；（5）诱导生根。上述方法中，步骤（1）至步骤（5）中的环境温度为22~26℃，环境湿度优选60%~90%。使用上述方法，愈伤组织的分化率较高，可达50%以上；生根率达100%，移栽成活率达90%以上。

主权项

一种以珙桐叶片为外植体的组织培养获得珙桐再生苗的方法，其特征在于步骤如下：（1）珙桐叶片愈伤组织获得取灭菌后的幼嫩珙桐叶片，接种于愈伤组织诱导培养基上，避光培养25~30天，得珙桐叶片愈伤组织，所述愈伤组织诱导培养基以MS为基础培养基，每升愈伤组织诱导培养基中含有吲哚丁酸1.5~2.5mg、6‑苄氨基腺嘌呤0.5~1.5mg、蔗糖20~30g和琼脂粉5~5.8g，其pH值控制在5.8~6.1；（2）愈伤组织增殖将步骤（1）获得的珙桐叶片愈伤组织接种于愈伤组织增殖培养基上，避光培养18~28天，以使愈伤组织增大，所述愈伤组织增殖培养基以MS为基础培养基，每升愈伤组织增殖培养基中含有吲哚丁酸1.5~2.5mg、6‑苄氨基腺嘌呤1~2.5mg 、蔗糖20~30g和琼脂粉5~5.8g，其pH值控制在5.8~6.1；（3）诱导丛生芽将步骤（2）增殖后的珙桐叶片愈伤组织切割后接种于芽分化培养基上，于光照强度1500~2000lx、光照时间10~14h/d的光照条件下培养25~30天，以诱导丛生芽，所述芽分化培养基以MS为基础培养基，每升芽分化培养基中含有吲哚丁酸 0.33~1mg、6‑苄氨基腺嘌呤 3~10mg、蔗糖20~30g和琼脂粉5~5.8g，其pH值控制在5.8~6.1；（4）丛生芽增殖把步骤（3）获得的丛生芽切割后接种于芽增殖培养基上，于光照强度1500~2000lx、光照时间10~14h/d的光照条件下培养25~30天，以使丛生芽生长，所述芽增殖培养基以MS为基础培养基，每升芽增殖培养基中含有6‑苄氨基腺嘌呤0.1~0.5mg、赤霉素0.1~0.5mg、蔗糖20~30g和琼脂粉5~5.8g，其pH值控制在5.8~6.1；（5）诱导生根从步骤（4）增殖后的丛生芽上切下幼芽，接种于第一生根培养基中培养3~6天，再转接到第二生根培养基中培养，在第二生根培养基中的培养时间以达到幼苗移栽要求为限，用上述两种生根培养基培养时的光照条件为：光照强度为1500~2000lx、光照时间10~14h/d，所述第一生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，每升第一生根培养基中含有生长素5~15mg、蔗糖15~20g和琼脂粉5~5.8g，其pH值控制在5.8~6.1，所述第二生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，每升第二生根培养基中含有活性炭1~2g、蔗糖15~20g和琼脂粉5~5.8g，其 pH值控制在5.8~6.1。