[发明专利]一种从植物提取物中筛选1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶抑制剂的方法

摘要

本发明涉及一种从植物提取物中筛选1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸合酶(DXS酶)抑制剂的方法。通过采用柱前衍生-高效液相色谱法检测底物的转化量来评价所添加的植物提取物对DXS酶的磷酸丙糖异构化活性的抑制作用。主要涉及到：将植物提取物加入到DXS酶催化的磷酸丙糖异构化反应体系中，在一定温度下反应后，以磷酸酶水解反应体系中的磷酸丙糖，再加入2，4-二硝基苯肼进行衍生化，然后以高效液相色谱法利用甲醇-水或乙腈-水为流动相梯度，紫外检测仪检测。本方法在筛选过程中，所用底物D-甘油醛3-磷酸(D-GAP)或磷酸二羟丙酮(DHAP)均不含同位素标记；筛选过程简单、快速、可行性强，不需要用昂贵的大型仪器检测。

主权项

一种从植物提取物中筛选DXS酶抑制剂的方法，其特征在于：该方法包括以下环节：(1)建立筛选反应体系：采用D‑甘油醛3‑磷酸(D‑GAP)或磷酸二羟丙酮(DHAP)作为底物，与二价金属离子和1‑脱氧‑D‑木酮糖5‑磷酸合酶(DXS酶)加入到缓冲液中，再加入所要检测的植物提取物样品，在25‑45℃下孵育；所述二价金属阳离子为Mg2+、Mn2+、Co2+或Zn2+；然后加入磷酸酶，在30‑45℃下孵肓，水解磷酸酯；然后加入色谱纯试剂和衍生化试剂进行衍生化；(2)按照以上环节(1)建立对照反应体系：采用D‑甘油醛3‑磷酸(D‑GAP)或磷酸二羟丙酮(DHAP)作为底物，与二价金属离子和DXS酶加入到缓冲液中，在25‑45℃下孵育；所述二价金属阳离子为Mg2+、Mn2+、Co2+或Zn2+；然后加入磷酸酶，在30‑45℃下孵育，水解磷酸酯；然后加入色谱纯试剂和衍生化试剂进行衍生化；(3)反相高效液相色谱检测以环节(2)的对照样为参比，用HPLC方法检测环节(1)的样品中D‑GAP或DHAP的转化情况：采用的底物为D‑GAP，则根据底物D‑GAP的转化量或产物DHAP的生成量是否改变来判断所加样品对DXS酶活性有无影响；或者，采用的底物为DHAP，则根据底物DHAP的转化量或产物D‑GAP的生成量是否改变来判断所加样品对DXS酶活性有无影响；进而筛选出DXS酶的有效抑制剂。