[发明专利]一种施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种施罗氏弧菌多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒和检测方法。它是先提取施罗氏弧菌的基因组DNA，以其作为模板，用13对多基因PCR引物和一对通用引物进行多重PCR扩增得到多重PCR反应产物，利用GenomeLab GeXP遗传分析系统对其进行检测分析。本发明针对已知13个施罗氏弧菌毒力基因设计特异性引物，通过单管反应，一次性快速高效的检测13种基因而得知检测出样品中是否含有携带毒力基因、具有潜在致病能力的施罗氏弧菌，其检测覆盖面广，可大大提高施罗氏弧菌检测的准确性。对珊瑚白化现象的防治提供一定的理论基础，对进一步保护我国珊瑚岛屿，防止其进一步退化具有重要的现实意义。

主权项

一种施罗氏弧菌(Vibrio shilonii)多重毒力因子GeXP快速检测试剂盒，包括PCR反应试剂，多基因PCR引物和GeXP多重扩增反应试剂，其特征在于，所述的多基因PCR引物包括13对多基因PCR引物和一对通用引物，具体为：为毒力基因sod设计的引物sod‑F：AGGTGACACTATAGAATA CCGTTCATGTAGTCTGGACGsod‑R：GTACGACTCACTATAGGGA GCAGCGACTCCACTAACAGA为毒力基因fldA设计的引物fldA‑F：AGGTGACACTATAGAATA ACGTGACATCGTTGAAGCAAfldA‑R：GTACGACTCACTATAGGGA AGGCCAACGAATTGTGACTC为毒力基因ompUL设计的引物ompUL‑F：AGGTGACACTATAGAATA TTGGTGCGGGTTATCAGCTAompUL‑R：GTACGACTCACTATAGGGA CGAATACGGTCTGTTAGGTCG为毒力基因toxS设计的引物toxS‑F：AGGTGACACTATAGAATA CGCGGATATATTCACCACCTtoxS‑R：GTACGACTCACTATAGGGA CAATGAATGGCAATCCAACA为毒力基因Bcp设计的引物Bcp‑F：AGGTGACACTATAGAATA AACGTTGTGAGCGTCAAGCBcp‑R：GTACGACTCACTATAGGGA GGCAACACCGTCACACTACA为毒力基因dnaJ设计的引物dnaJ‑F：AGGTGACACTATAGAATA ATTCGGTGATATCTTTGGCGdnaJ‑R：GTACGACTCACTATAGGGA CTCAACGAGCGTTGGAACTT为毒力基因mshA设计的引物mshA‑F：AGGTGACACTATAGAATA CTGAGCGACGGTTATCAACAmshA‑R：GTACGACTCACTATAGGGA ATGGTCACGTTAGTTTGCCC为毒力基因z2z3设计的引物z2z3‑F：AGGTGACACTATAGAATA CTCTCATTGGTTAGCCCTCGz2z3‑R：GTACGACTCACTATAGGGA ATCATCGGAAGATCAGCGTC为毒力基因fimA设计的引物fimA‑F：AGGTGACACTATAGAATA AGCTGTGGTTGATTGGCTCTfimA‑R：GTACGACTCACTATAGGGA TACCGTTACTGGTGGTGCAA为毒力基因pyrH设计的引物pyrH‑F：AGGTGACACTATAGAATA GACCGTATGGCACAAGAGGTpyrH‑R：GTACGACTCACTATAGGGA CGCATAGCTAGGCCATTCAT为毒力基因toxRL设计的引物toxRL‑F：AGGTGACACTATAGAATA ACTACGACCATTGCCCAAACtoxRL‑R：GTACGACTCACTATAGGGA TAGTGTTGAGCGCTCTGTGC为毒力基因rpoA设计的引物rpoA‑F：AGGTGACACTATAGAATA ACGTGTTGAGCAGCGTACTGrpoA‑R：GTACGACTCACTATAGGGA AATAGGATCGAACTCCGGCT为毒力基因recA设计的引物recA‑F：AGGTGACACTATAGAATA ACCATGGACGTTGAAACCATrecA‑R：GTACGACTCACTATAGGGA GGCATGTTCTGCATCGATAA含有荧光标记的通用引物对序列，可按常规技术将荧光标记加到通用引物序列上：TY‑F:5’‑AGGTGACACTATAGAATA‑3’TY‑B:5’‑GTACGACTCACTATAGGGA‑3’。