[发明专利]一种用ANAPC13基因检测秦川牛体型大小的方法

摘要

本发明公开了一种用ANAPC13基因检测秦川牛体型大小的方法，该方法采用PCR-SSCP技术结合DNA测序来检测牛ANAPC13基因变异位点。SSCP结果出现三种带型，测序结果发现两个变异位点，分别位于第一外显子17bp处的A→G突变和42bp处的C→T突变。后来测序验证发现，两个位点在98%的个体中属于连锁突变。因此，我们将三种带型分别型命名为AACC、AGCT和GGTT，并在秦川牛404个体中做了分型统计及其与体尺性状的关联分析。该方法是一种在DNA水平上筛查和检测与秦川牛生长发育性状密切相关的分子遗传标记，以用于秦川牛的辅助选择和分子育种，加快秦川牛良种繁育速度。通过基因型的分析比较，从而预测和确定该秦川牛的体型大小，操作简单、费用低、精确度高，可进行快速检测。

主权项

一种用ANAPC13基因检测秦川牛体型大小的方法，其特征在于，包括下列步骤：步骤一，采用酚‑氯仿提取法提取秦川牛全血基因组DNA，TE缓冲液溶解，稀释至100ng/μL；步骤二，根据牛ANAPC13基因序列设计一对引物ANAPC13F和ANAPC13R，其中：ANAPC 13F：5’‑CCTCGCCAAATGGACTCAC‑3’ANAPC 13R：5’‑GAATGCCTTTTCCCCGCTA‑3’步骤三，利用该对引物ANAPC13F和ANAPC13R对牛的基因组DNA进行PCR扩增，得到的扩增片段位于ANAPC13F和ANAPC13R表示的引物扩增的第一外显子区，长度为388bp，经分析为该基因的非编码区；步骤四，扩增片段变性后，在10%的聚丙烯酰胺凝胶中电泳，银染和显色；步骤五，对SSCP不同带型进行分类，分为三种基因型，测序结果发现两个变异位点，分别位于第一外显子17bp处的A→G突变和42bp处的C→T突变；变异的两个位点确定为连锁关系，命名为AACC、AGCT和GGTT，将其与秦川牛体尺性状关联分析；步骤六，分析结果显示，AGCT型个体在体长，体高，腰高，腰角宽，胸围和坐骨端宽均极显著大于AACC型个体，但是三种基因型在胸深方面差异不显著。