[发明专利]加拿大一枝黄花内生真菌的抗菌发酵液的制备方法

摘要

本发明涉及加拿大一枝黄花内生真菌的抗菌发酵液的制备方法。该方法包括以下操作步骤：1.菌株活化，2.一级种子培养，3.二级种子培养，4.发酵培养，得到加拿大一枝黄花内生真菌发酵液，发酵液为褐色；加拿大一枝黄花内生真菌发酵液在无菌条件下过滤除去菌丝体，过0.22微米过滤器，即得到加拿大一枝黄花内生真菌的抗菌发酵液。本发明明确了具有广谱抗菌活性的球毛壳菌yt03（Chaetomiumglobosumyt03）菌株的抗菌发酵液的制备方法，通过对球毛壳菌yt03抗菌发酵液的抗菌试验发现该菌发酵液对供试六种植物病原真菌具有较为显著的抑制菌丝生长作用。

主权项

加拿大一枝黄花内生真菌的抗菌发酵液的制备方法，其特征在于：所述加拿大一枝黄花内生真菌命名为球毛壳菌yt03（Chaetomium globosum yt03），保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市北辰西路1号院3号，保藏日期2011年7月20日，保藏编号为CGMCC No.5088；具体发酵制备操作步骤如下：（1）菌种活化     在无菌条件下，用接种环挑取少许加拿大一枝黄花内生真菌试管斜面保藏菌种，转接于已灭菌的马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基平板中，置培养箱内温度28℃±1℃，活化培养5～7天，得到活化菌种；（2）种子培养用无菌打孔器(内径5mm)在无菌条件下将活化菌种打成直接为5mm菌碟，接种5块菌碟于含有50ml液体培养基的三角摇瓶内，恒温摇床培养，摇床转速160转/分，温度28℃±2℃，培养2～3天，得摇床种子； （3）发酵培养将摇床种子接种到装有50ml液体培养基的250ml三角摇瓶中，接种量5%，摇床转速160转/分，温度28℃±2℃，培养5～7天，得到加拿大一枝黄花内生真菌发酵液；加拿大一枝黄花内生真菌发酵液在无菌条件下过滤除去菌丝体，过0.22微米过滤器，即得到加拿大一枝黄花内生真菌的抗菌发酵液；发酵培养特征：培养第1天，菌体为少量灰色的粉末；培养第3天，淡粉色的细粉末减少，出现黑色的小菌丝球；培养第5天，黑色菌丝球继续增多，并且体积变大，发酵液为黄褐色；培养第7天，出现大量黑色的菌丝球，体积也变大，发酵液为褐色；所述马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基：马铃薯 200克、葡萄糖20克、琼脂18克、蒸馏水1升； 所述液体培养基：蛋白胨15克，葡萄糖 20克，氯化钙 0.5克，磷酸氢二钾0.1克，硫酸亚铁  0.01克，硝酸钠1克，水 1000 毫升，pH自然；使用前上述两种培养基在温度121℃、压力0.1MPa下灭菌30 min。