[发明专利]快速检测食品中单核增生李斯特菌的方法

摘要

本发明公开了一种单核增生李斯特菌的环介导等温扩增的检测方法。本发明针对单核增生李斯特菌设计和筛选了一套特异性检测引物，采用LAMP对待检测食物样品进行检测，确认是否存在单核增生李斯特菌的特异性基因片段，进而确定待检测样品是否受到单核增生李斯特菌污染。此外，在进行LAMP检测前，本发明还通过叠氮溴化丙锭处理食物样品以去除死菌的干扰，从而在随后进行的LAMP检测中只会有活菌的检测信号。本发明的检测方法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短，不需要昂贵的实验仪器，操作过程简单，并且不会被食物样品中残留的DNA或死菌的干扰，特别适合在野外和基层检测机构和食品企业中自检使用。

主权项

一种快速检测食品中活的单核增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）的检测方法，其特征在于包括如下步骤：（1）取食物样本，加缓冲液碾磨制成匀浆液，离心去除大的食物残渣，取上清得菌悬液，整过程均为无菌操作；（2）取制备好的菌悬液加叠氮溴化丙啶溶液，使叠氮溴化丙啶的终质量浓度为3 μg/mL，混匀后室温避光培养3~8min，卤素灯曝光，光照交联时样品置于冰上，交联后的悬浮液离心，所得沉淀用沸水浴法提取DNA；（3）取DNA，进行LAMP反应，LAMP反应所用的引物为：上游外引物F3（5’→3’）： AAGCTGCTTTTGATGCTG下游外引物B3（5’→3’）： TCGATTAAAAGTAGCGCCTT上游内引物FIP（5’→3’）：CGGCTTTGAAGGAAGAATTTTTGAT‑CGTAAGCGGAAAATCTGTC下游内引物BIP（5’→3’）：TACGGAGGTTCCGCAAAAGA‑TTTTCAAAATATCGCGTAAGTCTC上游环引物LF（5’→3’）： ATTTGTTAGTTCTACATCACCTG下游环引物LB（5’→3’）: AAGTTCAAATCATCGACGGC（4） LAMP反应结束后，取反应液检测单核增生李斯特菌存在。