[发明专利]一种南美蟛蜞菊总RNA的提取方法

摘要

本发明一种南美蟛蜞菊总RNA的提取方法,属于生物技术领域。将新鲜的南美蟛蜞菊材料用液氮研磨成细粉状，65℃温浴30分钟后加入等体积的氯仿混匀，4℃低温离心。加入LiCl溶液进行沉淀，离心弃上清，用TE溶解沉淀后加入等体积的氯仿，离心，取上清至新的离心管中，加入乙醚离心取上清，重复乙醚操作两次后，再加入NaAc和无水乙醇沉淀RNA。离心后弃上清，用70%的乙醇洗涤一次，获得的沉淀室温下干燥，用灭菌的DEPC水溶解，-80℃中保存备用。本发明实验过程简单，设备和实验条件要求低，结果准确、有效，重复性好，对于富含酚类、多糖的植物组织总RNA的提取具有重要的指导和实际意义。

主权项

一种南美蟛蜞菊总RNA的方法，其特征在于按照以下步骤进行：1）取0.5~1.0g新鲜的南美蟛蜞菊叶片在液氮中充分研磨至细粉状，并快速转移到装有1.5~2mL预冷RNA提取缓冲液的离心管中，振荡混匀后于65℃水浴30min~60min； 2）加入1.5~2mL氯仿，上下颠倒离心管混匀，4℃，12000~14000r/min,离心10min~15min； 3）从上层水相中转移900~1200uL至另一离心管中，加入300~400uL 8mol/L的LiCl溶液，混匀后，‑20℃沉淀过夜；4℃，12000~14000r/min，离心30min~60min，弃上清，加入500ulTE溶解； 4）加入500uL氯仿，上下颠倒混匀，4℃，12000~14000r/min，离心10min~15min； 5）转移400uL上层水相至新的离心管中，加入400uL乙醚，并剧烈震荡混匀，4℃，12000min~14000r/min，离心10min~15min； 6）将300uL上层水相转移到新的离心管中，加入100uL pH5.2的3mol/LNaAc和750uL无水乙醇，‑50℃放置30min~60min； 7）4℃，12000~14000r/min离心10min~15min，弃上清，收集沉淀； 8）沉淀用1mL体积百分浓度为70%~80%乙醇洗涤两次，4℃，8000~10000r/min离心，弃上清，室温下自然干燥；9）用灭菌的DEPC水溶解沉淀，‑80℃保存备用。