[发明专利]一种用于羊泰勒虫病检测的间接ELISA方法有效
| 申请号： | 201210121339.8 | 申请日： | 2012-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN102662058A | 公开（公告）日： | 2012-09-12 |
| 发明（设计）人： | 殷宏;罗建勋;李有全;何海宁;刘志杰;杨吉飞;关贵全;陈泽;牛庆丽;马米玲;刘爱红;刘军龙;任巧云;鲁炳义 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | G01N33/569 | 分类号： | G01N33/569;G01N33/543 |
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| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用TlSP检测羊泰勒虫病的间接ELISA方法，包括如下步骤：①包被；②封闭；③与一抗结合；④与二抗结合；⑤显色；⑥终止；⑦结果判定：样品的效价表示为：(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)，若效价小于0.20，为阴性；效价在0.20～0.30之间为可疑；效价大于0.30为阳性；本发明选取中国羊泰勒虫病的流行虫种-吕氏泰勒虫的TlSP基因，通过克隆表达，以纯化的TlSP蛋白作为诊断抗原，采用间接ELISA模式，研制出吕氏泰勒虫TlSP抗体检测试剂盒。该法操作简单，耗时短，成本低，高通量。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 用于 泰勒 检测 间接 elisa 方法 | ||
【主权项】：
一种利用TlSP检测羊泰勒虫病的间接ELISA方法，其特征在于，其包括如下步骤：①包被：以包被缓冲液将表达产物TlSP蛋白稀释至工作浓度，加入96孔酶标板，每孔50μL，4℃过夜；以洗涤缓冲液PBST洗涤，拍干；②封闭：每孔加入50μL封闭液，37℃封闭40分钟；以洗涤缓冲液PBST洗涤，拍干；③与一抗结合：待检血清样品及任选的阳性和阴性对照用血清稀释液(含5％脱脂奶粉，1％大肠杆菌萃取物的封闭液)1∶100稀释，每孔加入50μL，37℃结合1小时；以洗涤缓冲液PBST洗涤，拍干；④与二抗结合：兔抗绵羊IgG/HRP或兔抗山羊IgG/HRP用PBST 1∶1500稀释，每孔加入50μL，37℃结合1小时；以洗涤缓冲液PBST洗涤，拍干；⑤显色：每孔加入50μL H2O2/OPD，37℃避光15分钟；⑥终止：每孔加入1.25mol/L H2SO4，测定OD492；⑦结果判定：样品的效价表示为：(OD样品‑OD阴性)÷(OD阳性‑OD阴性)，若效价小于0.20，为阴性；效价在0.20～0.30之间为可疑；效价大于0.30为阳性。
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