[发明专利]一种用于羊泰勒虫病检测的间接ELISA方法

说明书

技术领域

本发明涉及畜牧兽医领域，尤其涉及的是一种用于羊泰勒虫病检测的间接ELISA方法。

背景技术

羊泰勒虫病(ovine Theileriosis)是由媒介蜱传播的由泰勒科泰勒属的原虫寄生于绵羊和山羊巨噬细胞、淋巴细胞和红细胞内所引起的疾病的总称，属于一种蜱传性血液原虫病。在我国，已报道的羊泰勒虫病的病原有尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫和绵羊泰勒虫。本病危害严重，可引起羔羊和外地引进羊大量死亡，使慢性发病的山羊和绵羊发育变缓，产肉量和产毛量显著下降，从而给养羊业造成重大经济损失。

在临床上，泰勒虫病的诊断可根据临床症状如高热、贫血、体表淋巴结肿大和异嗜等，及流行病学资料如发病季节，本地区蜱的活动情况，动物在近期是否被蜱叮咬，发病地点，家畜是本地动物还是外地引入动物等做出初步的诊断。确诊泰勒虫病应查到病原，由于泰勒虫在进入畜体后主要以裂殖体和红细胞内虫体形式存在，病原检查只有查到一种阶段的虫体即可确诊，常用的方法有PCR、RT-PCR、RLB、LAMP等。由于虫体进入畜体之后，宿主即产生抗体，因此检测抗体的血清学诊断方法也用于泰勒虫病的诊断^[1-9]

近年来，在牛的泰勒虫病研究中，国外以牛的环形泰勒虫的TaSP为目的蛋白建立了间接ELISA技术并相继进入田间试验^【2-6】。在我国，简子健等以纯化的牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白作为检测抗原，通过优化ELISA反应条件，建立检测牛环形泰勒虫血清特异性抗体的间接ELISA方法^[1]。这是国内首次利用重组蛋白建立的牛环形泰勒虫病血清学诊断方法，为大规模地进行牛环形泰勒虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。

在我国，2002年高玉龙以羊的泰勒虫虫体粗抗原建立了间接ELISA方法，但该法与绵羊巴贝斯虫有交叉反应，易造成假阳性结果和非特异反应^[8]。2006年，Miranda以泰勒虫热休克蛋白Hsp70类似物建立了羊泰勒虫的间接ELISA方法^[7]。2010年，刘志杰等以尤氏泰勒虫TuiP重组蛋白为基础，建立了间接ELISA方法，该法仅用于由尤氏泰勒虫引起的羊泰勒虫病的检测，而对吕氏泰勒虫引起的羊泰勒虫病检测不到抗体^[9]。

参考文献：

1.简子健，马素贞，黄家雨，孙其吉吉，沈炯玉，苗中秋，吕伟.牛环形泰勒虫GST-Tams1融合蛋白间接ELISA检测方法的建立.新疆农业科学2011，48(3)：578-583.

2.Mohamed AM，Abdel-Rady A，Ahmed LS，El-Hosary A.Evaluat ion of indirect TaSP enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of tropical theileriosis in cattle(Bos indicus)and water buffaloes(Bubalus bubalis)in Egypt.Vet Parasitol.2011Nov 12.

3.Mohammad Al-Saeed AT，Omer LT，Abdo J，Habibi G，Sal ih DA，Seitzer.Epidemiological studies on tropical theileriosis(Theileria annulata infection of cattle)in Kurdistan Region，Iraq.Parasitol Res.2010Jan；106(2)：403-7.Epub 2009 Nov 13.

4.Seitzer U，Beyer D，Kullmann B，Bakheit MA，Ahmed JS.Evaluation of Theileria annulata recombinant immunodominant proteins for the development of ELISA.Transbound Emerg Dis.2008Aug；55(5-6)：244-8.