[发明专利]培育耐盐耐低温长春花株系快速繁殖的方法

摘要

本发明为一种培育耐盐耐低温长春花株系快速繁殖的方法。本发明以制备长春花生长培养基、诱导生长培养基和耐盐耐低温筛选培养基为基础，并以野生长春花叶片为原始材料诱导出无菌苗，经过无菌苗快速繁殖及多代诱导驯化，建立了适合耐盐耐低温长春花株系培育系统，耐盐耐低温长春花株系的生物碱含量比野生长春花要高20%左右。本发明的优点是：(一)培育过程完全可控，不受自然环境的影响；(二)耐盐耐低温长春花可在盐碱滩涂正常生长；（三）延长了长春花在长江流域的生长期、增加了长春花的生物量。

主权项

一种培育耐盐耐低温长春花株系快速繁殖的方法，其特征在于：包括如下步骤：1）分别制备长春花生长培养基、诱导生长培养基和耐盐耐低温筛选培养基：取MS基本培养基，以每升加入和6～8克琼脂粉得长春花生长培养基备用；另取MS基本培养基，以每升加入0.1～0.3克萘乙酸、2～4克6‑苄氨基嘌呤、0.2～0.4克秋水仙素和6～8克琼脂粉为单位，得诱导生长培养基备用；另取MS基本培养基，以每升加入10~20克氯化钠和6～8克琼脂粉为单位，得耐盐耐低温筛选培养基备用；2）长春花无菌苗的制备：以长春花种子为外植体，将其用浓度为70%医用乙醇浸泡30秒，随后转移至浓度为0.2%的氯化汞水溶液中进行表面消毒；将消毒后的外植体播种于固体生长培养基中，在温度为25+1℃，光照为100μmol·m‑2·s‑1条件下，经4周培养后，得无菌苗；3）耐盐耐低温长春花株系的诱导：将步骤2所得无菌苗作为种源，接种于诱导生长培养基中扩增及诱导，培养条件为温度25+1℃、光照为100μmol·m‑2·s‑1，培养40天，得诱导长春花分化苗；将所诱导长春花分化苗在所述耐盐耐低温筛选培养基中接种，继续培养40天，培养条件为温度25+1℃、光照为100μmol·m‑2·s‑1；随后从所得耐盐耐低温植株中提取获得生物碱；将步骤1中所述长春花生长培养基、诱导生长培养基和耐盐耐低温筛选培养基分别调节pH值至5.8后，高压灭菌；将步骤1中所述长春花生长培养基、诱导生长培养基和耐盐耐低温筛选培养基、用HCl或NaOH或两者结合调节长春花生长培养基、诱导生长培养基和耐盐耐低温筛选培养基的pH值至5.8后，分别高压灭菌，并将长春花生长培养基、诱导生长培养基和耐盐耐低温筛选培养基分别分装于玻璃三角瓶中。