[发明专利]禽流感病毒灭活疫苗的制备方法及产品

摘要

本发明公开了一种禽流感灭活疫苗的制备方法及产品，通过禽流感适应毒适应传代细胞系的筛选、驯化，病毒适应细胞后连续扩增，直至接种至细胞培养瓶或生物反应器中培养，收获培养物经灭活后，与矿物油佐剂混合乳化制成疫苗。本发明避免采用禽用疫苗制造大批使用鸡胚的病毒繁殖方法，既降低资源消耗、减少环境污染、保障生物安全，又降低成本、提高生产效率；本发明能够产出高效价的病毒制备相应疫苗，满足快速、高效生产疫苗的要求。

主权项

一种禽流感灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：1)制苗用细胞的传代与培养：将细胞经EDTA‑胰酶细胞分散液消化传代，用细胞生长液在细胞培养瓶或生物反应器中培养，形成培养细胞；2)病毒适应细胞驯化：用细胞维持液将禽流感病毒稀释至浓度为0.1～5wt％的病毒液，将该病毒液接种到长成单层细胞的培养板，添加TPCK胰酶，在温箱吸附0.5～3h后补充细胞维持液，置于培养箱中培养；基于相同上述方法，连续传代使病毒适应细胞从而获得驯化好的禽流感生产毒种；3)任选地，建立病毒种子批：将低代毒种作为原始种子、基础种子、和/或生产种子；4)制苗用病毒的培养：将步骤1)的培养细胞接种步骤2)驯化好的禽流感生产毒种，添加TPCK胰酶，吸附0.5～3h后，添加细胞维持液继续培养；5)制苗用病毒液的收获：病毒培养至10～50h后，取样检测培养基中的葡萄糖残留含量及病毒液血凝价，当两项检测值均趋于稳定时，收获病毒液；6)任选地，制成疫苗成品：将收获的病毒液离心分离、灭活、乳化制成疫苗成品。