[发明专利]一种棘阿米巴荧光定量PCR检测试剂盒

摘要

一种棘阿米巴荧光定量PCR检测试剂盒，试剂盒内设有DNA提取液、特异性引物、TaqMan探针、PCR缓冲液、dNTP、尿嘧啶DNA糖基化酶、DNA聚合酶和DNA定量标准品组成。通过建立棘阿米巴基因拷贝数定量分析模型，根据样品各自的Ct值，可得出所测样本中棘阿米巴含量；本发明试剂盒既可以用于棘阿米巴的定性检测也可以进行定量检测，操作简单、效果显著；本发明试剂盒具有特异性好、灵敏度高的特点，降低了常规PCR方法的假阳性率，减少了常规PCR方法的产物污染问题，从而实现对棘阿米巴进行快速、准确、特异性的检测。

主权项

1.一种棘阿米巴荧光定量PCR检测试剂盒，特征在于：试剂盒内设有DNA提取液、特异性引物、TaqMan探针、PCR缓冲液、dNTP、尿嘧啶DNA糖基化酶、DNA聚合酶和DNA定量标准品；所述的DNA提取液由分装的异丙醇、体积浓度为75%的乙醇、TE缓冲液以及体积比为25:24：1的TE饱和酚、氯仿和异戊醇的混合溶液组成；所述的PCR缓冲液，包含的成份为：10-100mmoL/L的pH值为8.0的Tris-HCl、质量浓度为0.1%-0.5%的聚乙二醇辛基苯基醚，体积浓度为0.1%的乙基苯基聚乙二醇和1.0-10.0mmoL/L的氯化镁；所述的dNTP为dATP、dGTP、dCTP和dTTP的等摩尔数混合物；所述的DNA定量标准品，为碱基序列如SEQIDNO：4的目的基因和pUCmT质粒载体连接所构建的重组质粒DNA，其浓度为10⁶拷贝/微升；所述的特异性引物的上游引物，其碱基序列如SEQIDNO：1；特异性引物的下游引物，其碱基序列如SEQIDNO：2；TaqMan探针，其碱基序列如SEQIDNO：3。