[发明专利]一种番茄基因组总DNA提取试剂盒及其提取方法

摘要

本发明根据番茄的生长习性提供了一种番茄基因组总DNA提取试剂盒及其提取方法，包括以下试剂：(1)1M Tris-HCl(pH8.0)；(2)0.25M EDTA(pH8.0)；(3)2.5M NaCl；(4)TE(pH8.0)溶液；(5)Tris饱和酚：氯仿；(6)氯仿；(7)70％乙醇；(8)3M乙酸钠(PH＝5.2)；(9)无水乙醇；(10)2×CTAB提取液；(11)β-巯基乙醇；(12)异丙醇。该方法主要包括：取材冷却研磨、加缓冲液振荡后水浴抽提、放置沉淀、洗涤沉淀、风干纯化、溶解保存等步骤。本发明优化了番茄基因组DNA提取过程中番茄叶片用量、液氮研磨方法、水浴时间、洗涤以及纯化步骤等参数，可有效防止DNA的褐化，建立了一种适合大批量提取番茄幼嫩叶片基因组DNA的方法。用本发明方法提取番茄叶片的基因组DNA时间短、速度快、提取效率高，提取的DNA质量稳定，可应用于番茄种群遗传学、分子标记辅助育种等研究。

主权项

番茄基因组总DNA提取试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：(1)1M Tris‑HCl(pH8.0)：称取Tris·base 12.114g，用少量蒸馏水加热溶解，溶解后用浓盐酸调节pH＝8.0，最后加水定容至100mL，121℃ 25min高压灭菌；(2)0.25M EDTA(pH8.0)：称取EDTA钠盐9.305g，加少量蒸馏水溶解后，用NaOH调至pH＝8.0，最后加水定容至100mL，121℃ 25min高压灭菌；(3)2.5M NaCl：称取14.625g Nacl，加蒸馏水溶解后定容至100mL；(4)TE(pH8.0)溶液：量取前面灭过菌的1M Tris‑HCl(pH8.0)1mL，0.25MEDTA(pH8.0)0.4mL，加水定容至100mL备用；(5)Tris饱和酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)：量取50mL Tris饱和酚，48ml氯仿和2mL异戊醇，混匀即可；(6)氯仿∶异戊醇(24∶1)：量取96ml氯仿和4mL异戊醇，混匀即可；(7)70％乙醇：量取70mL无水乙醇，加水定容至100mL；(8)3M乙酸钠(PH＝5.2)：称量40.8gNaAC·3H2O于100ml烧杯中，加入约40ml的蒸馏水搅拌溶解，加入冰醋酸调节PH值至5.2，蒸馏水定容至100ml，121℃ 25min高压灭菌；(9)无水乙醇；(10)2×CTAB提取液；(11)β‑巯基乙醇；(12)异丙醇。