[发明专利]用以检测突变的方法与引物组

摘要

在此揭示以聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，简称PCR)为基础的方法，此方法可用以检测样本中目标基因之一所选区域中是否发生插入/缺失变异(相较于一参考序列)。目标基因具有一模板股与一编码链。此方法运用包含一抑制引物以及一正向引物的引物组。所用的抑制引物与正向引物部分序列重叠，但具有不同的解链温度，且抑制引物的3’端经修饰而能够防止抑制引物在PCR过程中延伸。因此，在特定的PCR条件下，能检测到PCR产物意味着在所选区域中发生了插入/缺失突变，而未检测到PCR产物意味着在所选区域中并未发生插入/缺失突变。

主权项

一种基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)的方法，用以检测一样本中一目标基因之一选定区域内相对于一参考序列是否有插入或缺失变异，包含以下步骤：(a)形成一混合物，其包含该样本与一引物组，其中该样本中的该目标基因包含一模板链，以及一编码链其与该模板链互补，且该引物组包含：(i)一抑制引物，其包含一序列，此序列与该模板链之该选定区域的序列以及紧接于该模板链之该选定区域之前的至少一核苷酸残基相同，其中该抑制引物之3’端经修饰以防止该抑制引物于该PCR过程中延伸；以及(ii)一正向引物，其包含一序列，此序列与位于该模板链之该选定区域上游之多个核苷酸残基相同，其中该正向引物之3’端的至少最后一个核苷酸残基与该抑制引物之5’端的至少第一个核苷酸残基相同；(b)对该混合物依序进行以下步骤：一变性步骤、一退火步骤、及一延伸步骤，其中于该退火步骤中，该正向引物与该抑制引物竞争以退火至该编码链；以及(c)决定经过步骤(a)与(b)后是否得到一PCR产物，其中该PCR产物之存在表示该样本中该目标基因之该选定区域内存有该插入或缺失变异，且该PCR产物的不存在表示该样本中该目标基因之该选定区域内不存有该插入或缺失变异。