[发明专利]一种用于检测免疫不育相关自身抗体的新型抗原

摘要

一种用于检测免疫不育相关自身抗体的新型抗原，该发明属生殖免疫学免疫不孕领域。目前，免疫不育者的实验室诊断主要是针对抗精子抗体。然而，精子抗原是一种复合性抗原，其中的大部分与不育无关。精子特异性乳酸脱氢酶是与不育有密切关系的精子抗原的一种。本研究利用分子克隆的方法构建了人精子特异性乳酸脱氢酶重组载体，将此载体转化E.coliBL21后在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导下，此转化菌可高效表达rhLDHC4蛋白，纯化后以此蛋白建立了人血清抗LDH-C4抗体（IgG型）检测的间接ELISA方法。实验结果表明：用此方法检测已育者血清和不明原因不育者血清。两者阳性率差别具有显著统计学意义。

主权项

本研究将从人睾丸λTripEx cDNA文库中克隆的人精子特异性乳酸脱氢酶（sperm‑specific lactate dehydrogenases, LDH‑C4）与高效原核表达载体pET‑28a(+)连接，构建了pET‑28(a+)‑hLDHC重组质粒，将此质粒转化入大肠杆菌Ecol.BL21（DE3）plysS溶原菌中表达，在0.1mM IPTG诱导下可高效表达可溶性的rhLDH‑C4蛋白，经Ni+‑NTA亲和层析法纯化并用透析带浓缩后，浓度可达1.0mg/ml，1000ml菌液共可获得目的蛋白约1.5mg；以此纯化蛋白作为包被抗原建立人血清抗LDH‑C4抗体（IgG型）检测的间接ELISA方法，为准确的检测不育患者体内的自身抗体（LDH‑C4抗体）提供一种可靠的临床参考指标；故要求如下：（1）pET‑28(a+)‑hLDHC原核重组载体的保存及使用。