[发明专利]一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法无效
| 申请号： | 201110403007.4 | 申请日： | 2011-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN102417920A | 公开（公告）日： | 2012-04-18 |
| 发明（设计）人： | 应国清;李慧娟;王鸿;易喻;梅建凤;陈建澍 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12P21/06 | 分类号： | C12P21/06;C12N11/12 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;王兵 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法：将活化的固定化木瓜蛋白酶于pH5.00.1mol/L醋酸缓冲液中，加入抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体，30～60℃水浴反应4～24h，反应液抽滤，滤饼B为固定化木瓜蛋白酶回收利用，滤液B即为含单克隆抗体片段的水解液，采用弱阴离子交换层析对含单克隆抗体片段的水解液进行分离纯化，获得所述抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段；本发明方法操作简便、纯化步骤少、所得抗体片段纯度高；本发明中制备的抗体片段只需经过一步纯化就可达到90％以上的纯度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 绒毛 促性腺激素 单克隆抗体 片段 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段的制备方法，其特征在于所述方法为：将含0.1～1mmol/L DTT和0.1～2.5mmol/L EDTA的pH5.0～9.0的0.1mol/L醋酸缓冲溶液在30～50℃下水浴5～10min，加入固定化木瓜蛋白酶，30～50℃水浴20～30min，抽滤，弃去滤液A，获得滤饼A即为活化的固定化木瓜蛋白酶；将活化的固定化木瓜蛋白酶于pH5.0、0.1mol/L醋酸缓冲液中，加入抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体，30～60℃水浴反应4～24h，反应液抽滤，滤饼B为固定化木瓜蛋白酶回收利用，滤液B即为含单克隆抗体片段的水解液；采用弱阴离子交换层析对所述含单克隆抗体片段的水解液进行分离纯化，获得所述抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体片段；所述固定化木瓜蛋白酶以氨化纸纤维为载体，以戊二醛为交联剂，以木瓜蛋白酶为底物，于含1mmol/LDTT和2mmol/L EDTA的pH5.0的0.1mol/L醋酸缓冲液中，室温下搅拌8～24h，抽滤，得滤饼C即为固定化木瓜蛋白酶；所述氨化纸纤维是纸纤维先经0.1～0.2mol/L的NaOH溶液处理2～3h，再用环氧氯丙烷于60～70℃活化0.5～1h，最后用对苯二胺于40～50℃氨化0.5h，用蒸馏水充分洗涤，真空干燥至恒重，获得氨化纸纤维；所述固定化木瓜蛋白酶质量用量以抗体体积计为0.1～0.2g/ml抗体，载酶量为0.002g/g固定化酶，所述抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体利用辛酸‑硫酸铵法对小鼠腹水进行纯化获得。
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