[发明专利]大泷六线鱼细胞系的构建方法

摘要

本发明公开了一种大泷六线鱼细胞系的构建方法，包括如下步骤：⑴选择DＭＥＭ/F12培养基，并加入胎牛血清、人碱性成纤维细胞生长因子、I型胰岛素样生长因子和硫酸软骨素制备细胞培养液，在4℃的环境下存放；⑵在超净工作台上取大泷六线鱼的组织进行双抗和漂洗处理，在培养瓶中进行原代培养；⑶待细胞长成单层后制成细胞悬液并加入培养液进行传代培养。本发明的方法，步骤简单，易操作；构建的大泷六线鱼鳍、吻端和肾脏组织细胞系形态为纤维样，可以连续传代并直接应用于病原特性研究、疫苗研制及功能基因研究，满足了对大泷六线鱼理论研究及病毒疫苗研制等应用研究的需要；该构建方法也适用于其他鱼类构建鱼鳍、吻端和肾脏的细胞系。

主权项

一种大泷六线鱼细胞系的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：⑴、制备细胞培养液选择DMEM/F12培养基，向培养基内分别加入胎牛血清、人碱性成纤维细胞生长因子、I型胰岛素样生长因子和硫酸软骨素，使胎牛血清占总体积的20%，人碱性成纤维细胞生长因子的浓度为5ng/ml, I型胰岛素样生长因子的浓度为40ng/ml，硫酸软骨素的浓度为20ug/ml；在4℃的环境下存放；⑵、原代培养在超净工作台上取大泷六线鱼的组织，用青霉素和链霉素的混合液进行浸泡处理，青霉素的浓度为100IU/ml，链霉素的浓度为100ug/ml，处理时间为30分钟；再用PBS漂洗后，剪成0.8～1.2mm3的块状，经上述处理的组织块均匀接种于25cm2 细胞培养瓶中，加入培养液3 ml，在25℃CO2培养箱中启动原代培养；⑶、传代培养待细胞长成单层后，吸出培养瓶中的培养液，加入0.25%的胰蛋白酶溶液1ml，消化1min，细胞変圆后，吸去胰蛋白酶溶液，将之前吸出的旧培养液加回，用吸管吹打培养瓶底，制成细胞悬液；向细胞悬液内补入新的培养液，细胞悬液与培养液的体积比为1:2，然后接种于两个培养瓶内；在25℃CO2培养箱中培养；待细胞再次长成单层后，仍按照上述方法进行传代。