[发明专利]动物Torque Teno病毒环介导等温扩增技术快速检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明设涉及动物疫病分子生物学检测方法及检测试剂领域，具体涉及一种动物TorqueTeno病毒环介导等温扩增技术快速检测用引物、试剂盒及其检测方法。本发明根据动物TorqueTeno病毒的两种不同血清型基因序列，用ClustalW进行多重比对，分析序列的保守区，采用LAMP引物设计软件，分别设计内引物和外引物，均可特异性的实现快速对TTV1和TTV2血清型的检测与鉴别。本发明公开了一种快速、灵敏度高、特异性强、操作简便、设备要求低、省时省力并且易于观察结果的环介导等温扩增技术对TorqueTeno病毒进行检测的方法，没有复杂的后处理，适用性广。

主权项

动物Torque Teno病毒环介导等温扩增技术快速检测试剂盒，其特征在于：它包括LAMP扩增反应液I管、LAMP扩增反应液Ⅱ管、Calcein显色剂管、阳性对照管、阴性对照管和灭菌去离子水管，其中：所述 LAMP扩增反应液I 管 管内由以下反应液组成：序列为SEQ ID NO1的60 mmol/L的TTV1内引物上游1.0 μL；序列为SEQ ID NO2的60mmol/L的TTV1内引物下游1.0 μL；序列为SEQ ID NO3的5mmol/L的TTV1外引物上游1.0 μL；序列为SEQ ID NO4的5 mmol/L的TTV1外引物下游1.0 μL；10×LAMP buffer 缓冲液 12.5μL；5U/μL Bst DNA 聚合酶 0.8μL；灭菌去离子水 3.7μL；合计21 μL，为单次反应的用量；所述LAMP 扩增反应液Ⅱ管 管内由以下反应液组成：序列为SEQ ID NO5的60mmol/L的TTV2内引物上游1.0 μL；序列为SEQ ID NO6的60mmol/L的TTV2内引物下游1.0 μL；序列为SEQ ID NO7的5 mmol/L的TTV2外引物上游1.0 μL；序列为SEQ ID NO8的5 mmol/L的TTV2外引物下游1.0 μL；10×LAMP buffer缓冲液 12.5μL；5U/μL Bst DNA 聚合酶 0.8μL；灭菌去离子水 3.7μL；合计21 μL，为单次反应的用量；所述阳性对照管 管内为TTV1和TTV2阳性重组质粒，比例为1:1，体积为20μL；TTV1阳性重组质粒pMD19‑T‑G的DNA序列为SEQ ID NO9；TTV2阳性重组质粒pMD19‑T‑S的DNA序列为SEQ ID NO10；所述阴性对照管 管内为猪Torque Teno病毒阴性的猪血清，体积约50μL；所述Calcein显色剂管 管内体积约20μL；所述灭菌去离子水管 1mL～2mL。