[发明专利]一种软骨干细胞分离培养方法

摘要

本发明提供了一种软骨干细胞分离培养方法。本发明所述的软骨干细胞为由软骨组织细胞筛选而来，经特定培养基培养条件维持的成纤维样细胞，具骨、软骨及脂肪分化能力，与成体细胞相比还具有良好的扩增能力，自原代收获后可传至15代以上而保持原来特性。本发明利用特定培养条件进行筛选，纯化出软骨干细胞，使软骨干细胞含量在95％以上，此技术将促进软骨组织性特异干细胞的收获和应用于骨、软骨组织工程。

主权项

一种软骨干细胞分离培养方法，所述方法包括：(1)取三代以内的软骨细胞，用细胞培养基I培养至软骨细胞长满培养皿；所述细胞培养基I终浓度组成如下：5～20％胎牛血清，50～200U/ml青霉素，50～200U/ml链霉素，0.5～2mM L‑谷氨酰胺，溶剂为F12‑DMEM；(2)软骨细胞长满后用胰酶‑EDTA消化成单细胞悬液，以小于50个细胞/cm2的密度接种至培养板，利用细胞培养基II进行培养10～14天；所述细胞培养基II终浓度组成如下：5～20％胎牛血清，50～200U/ml青霉素，50～200U/ml链霉素，溶剂为L‑DMEM；(3)待获得细胞平铺面积占培养板20～30％细胞量时，更换用细胞培养基III培养；所述细胞培养基III终浓度组成如下：5～20％胎牛血清，50～200U/ml青霉素，50～200U/ml链霉素，溶剂为L‑DMEM；(4)待细胞呈现50％以上面积融合率时，用胰酶‑EDTA消化成单细胞悬液，以50～100个细胞/cm2的密度，接种至培养板，用细胞培养基III进行培养；传代细胞经细胞鉴定，获得所述软骨干细胞；所述细胞培养基III终浓度组成如下：5～20％胎牛血清，50～200U/ml青霉素，50～200U/ml链霉素，溶剂为L‑DMEM。