[发明专利]一种二十碳五烯酸生产菌株的筛选方法

摘要

一种二十碳五烯酸生产菌株的筛选方法，本发明是将采集的土样用诱物块诱导培养，将分离纯化得到的纯菌株经染色后初步筛选，再经扩大培养后提取油脂，进行气相色谱分析，筛选得到EPA含量高的菌株。本发明能快速有效地筛选到二十碳五烯酸产量高的真菌菌株，方法步骤简单、筛选周期短，而且所筛选菌株的花生四烯酸含量低、繁殖快、易培养，适合于工业化生产，对扩大二十碳五烯酸的微生物来源及其商业化生产具有重要意义。

主权项

一种二十碳五烯酸生产菌株的筛选方法，其特征在于，具体包括：步骤一、诱导培养：将采集的土样置于无菌培养皿内，喷适量无菌水保持湿度，将经灭菌的诱物块按每皿1～5块均匀放置在培养皿内的土样上，使诱物部分埋于土内，培养见诱物上有菌丝长出，将菌丝移植到含硫酸链霉素600单位/ml和青霉素钠盐1000单位/ml的PDA培养基平板上25℃培养2天；所述土样采集于菜园或果园5～15cm深处；所述的诱物块为1公分大小的黄瓜、土豆、黄豆、花生和胡萝卜块的任一种或是几种；步骤二、分离纯化：采用稀释涂布法对培养菌体进行分离纯化，直至得到纯菌株，将得到的菌株采用PDA培养基斜面保种，编号保存；步骤三、初步筛选：将纯化菌株从斜面中挑取菌丝于试管中，加入苏丹II与苏丹IV混合液染色5分钟，用水冲洗后取染色的菌丝置于载波片上显微镜观察；选取脂肪粒大而多的菌株为初筛菌种并确定其编号；步骤四、复筛：将初筛菌种采用PDA固体培养基扩大培养，得到的孢子采用液体培养基再次扩大培养；收获菌丝烘干后研磨，用石油醚提取油脂，经甲酯化后进行气相色谱分析，选取EPA含量高的菌株确定编号，完成EPA高产菌株的筛选。