[发明专利]一种二十碳五烯酸生产菌株的筛选方法

权利要求书

1.一种二十碳五烯酸生产菌株的筛选方法，其特征在于，具体包括：

步骤一、诱导培养：将采集的土样置于无菌培养皿内，喷适量无菌水 保持湿度，将经灭菌的诱物块按每皿1～5块均匀放置在培养皿内的土样上， 使诱物部分埋于土内，培养见诱物上有菌丝长出，将菌丝移植到含硫酸链 霉素600单位/ml和青霉素钠盐1000单位/ml的PDA培养基平板上25℃培养2 天；所述土样采集于菜园或果园5～15cm深处；所述的诱物块为1公分大小 的黄瓜、土豆、黄豆、花生和胡萝卜块的任一种或是几种；

步骤二、分离纯化：采用稀释涂布法对培养菌体进行分离纯化，直至得 到纯菌株，将得到的菌株采用PDA培养基斜面保种，编号保存；

步骤三、初步筛选：将纯化菌株从斜面中挑取菌丝于试管中，加入苏丹 II与苏丹IV混合液染色5分钟，用水冲洗后取染色的菌丝置于载波片上显微 镜观察；选取脂肪粒大而多的菌株为初筛菌种并确定其编号；

步骤四、复筛：将初筛菌种采用PDA固体培养基扩大培养，得到的孢子 采用液体培养基再次扩大培养；收获菌丝烘干后研磨，用石油醚提取油脂， 经甲酯化后进行气相色谱分析，选取EPA含量高的菌株确定编号，完成EPA高 产菌株的筛选。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤四中所述液体培 养基的组成为：葡萄糖50g/L，酵母膏5g/L，硝酸钠3g/L，磷酸氢二钠1g/L， 硫酸镁0.5g/L。