[发明专利]一种有关肺癌诊断试剂盒用于肺癌的检测方法

摘要

本发明涉及生物技术和医学领域，具体是一种有关肺癌诊断试剂盒用于肺癌的检测方法，通过基因重组技术纯化生产S100A2蛋白，纯化的S100A2蛋白，注射于动物体内以诱导产生特异性结合S100A2蛋白的多克隆抗体，另一方面方面，提供了一种肺癌的诊断试剂盒，该试剂盒含有容器，容器中含有S100A2蛋白；以及标签，所述标签说明所述试剂盒用于诊断肺癌。还含有抗S100A2蛋白的特异性抗体。试剂盒中或含有免疫组化相关试剂：PBS缓冲液，或0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液，或3％H2O2溶液，或辣根酶检测试剂，本发明深入地研究和大规模验证S100A2与肺癌的相关性，研究出可供临床应用的检测试剂，对肺癌进行诊断及为患者提供个体化辅助治疗方法。

主权项

一种有关肺癌诊断试剂盒用于肺癌的检测方法，包括试剂盒、S100A2蛋白，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)肺癌诊断试剂盒设有若干个容器或液态芯片和标签，所述的容器容器或液态芯片中分别设有a、S100A2蛋白的特异性抗体；和b、PBS缓冲液pH7.2‑7.4，或0.01mol柠檬酸钠缓冲液pH6.0，或3％H2O2溶液，或辣根酶检测试剂；(2)重组蛋白制备，扩增S100A2的核苷酸序列，或用含有该核苷的重组表达载体转化或转导至合适的宿主细胞；(3)在合适的培养基中培养宿主细胞；(4)从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质；(5)纯化的S100A2基因产物或者其具有抗原性的片段，注射于动物体内以诱导多克隆抗体制备的产生，同时特异性结合S100A2蛋白的抗体；(6)免疫组化：(a)脱蜡和水化：取5μm的石蜡切片于二甲苯中30min，脱蜡；然后通过一系列不同级别的乙醇浸泡至水化；(b)抗原修复：将切片置于10mM pH6.0柠檬酸缓冲液(pH6.0)中，微波炉加热15min；(c)微波处理后的切片仍置于柠檬酸缓冲液中15min，然后用流动的水冲洗5min；(d)将切片放置于3％H2O2室温孵育15min，以消除内源性过氧化物酶的活性；(e)切片置于1/500稀释的S100A2兔多克隆抗体中温育60min；(f)然后通过免疫组化辣根酶系统的DAB(二氨基联苯胺)底物染色；(g)切片用苏木精复染，然后通过一系列不同级别的乙醇浸泡至二甲苯，处理完的切片，镜检，实验中以水或缓冲液代替多克隆抗体做阴性对照，以S100A2过表达的标本为阳性对照，最后完成检测。