[发明专利]哺乳动物尿液中8-oxoG的检测方法

摘要

本发明涉及通过检测尿液中的8‑oxoG来评价哺乳动物老化程度的试剂盒、检测系统及8‑oxoG在评价哺乳动物老化中的应用。本发明的试剂盒包括8‑oxoG标准品，通过检测哺乳动物样本，特别是尿液中8‑oxoG的含量来评价哺乳动物的老化程度。本发明采用8‑oxoG为检测标的物，能够更准确、更快速和简便地评价动物的老化程度。

主权项

哺乳动物尿液中8‑oxoG的检测方法，包括：A、将尿液离心后取上清，按照1:9的比例混合上清液和水；加入混合后液体1/10体积的50ng/ml[¹⁵N₂¹³C₁]8‑oxoG作为内标，漩涡混匀；使用的内标用于校正测量仪器的误差；B、对8‑oxoG标准品进行稀释后，同样按照1:9的比例混合稀释后的标准品和水，再加入混合后的液体1/10体积的50ng/ml[¹⁵N₂¹³C₁]8‑oxoG作为内标，漩涡混匀；C、用HPLC‑UV检测样品中肌酐浓度；用于校正尿液不同稀释程度对结果的影响；D、利用HPLC‑MS/MS检测标准品8‑oxoG，制作8‑oxoG浓度对强度的标准曲线；同时利用HPLC‑MS/MS检测样品中的8‑oxoG的强度，对照标准曲线计算样品中的8‑oxoG的浓度；其中，HPLC‑MS/MS的条件为：流动相：90％10mM NH₄Ac,pH3.75+10％甲醇；流速：0.2ml/min；进样体积：20μl；运行时间：10min；质谱检测条件为：离子源为电喷雾离子源正离子模式，多反应监测扫描方式；DP:30；EP:7.0；CE:18；CXP:10；CUR:18；GS1:70；GS2:60；IS:5000；CAD:10；靶分子                 定量离子对8‑oxoG                 300/168[¹⁵N₂¹³C₁]8‑oxoG         303/171。