[发明专利]哺乳动物尿液中8-oxoG的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及用于评价哺乳动物老化程度的新标志物和方法，特别涉及通过检测尿液中的游离8-oxoG评价哺乳动物的老化程度。 

背景技术

老化是多种因素参与的结果，是进行性的、多水平的、不可逆的功能减退状态，对于老化的发生机制有众多学说，如：自由基学说，基因学说，端粒酶学说等。 

1956年，著名学者Harman首次提出了“自由基衰老理论”，指出老化是自由基对生物分子不断损伤的累积结果。近期的研究发现自由基不仅参与细胞的正常老化，而且与老化相关疾病的发生发展密切相关。 

自由基产生于生物体细胞的正常生理过程，自由基的重要作用之一是介导含氧物质生成活性氧(Reactive Oxygen Species，ROS)，ROS和自由基引起的氧化应激是造成DNA氧化损伤的主要因素。目前已发现的碱基损伤产物达20多种，其中脱氧鸟苷(dG)最易被氧化，产物8-氧化脱氧鸟苷(8-Hydroxy-2’-deoxyguanine，8-oxodG，见式1)被国际公认为是最重要的评价DNA氧化损伤的生物标志物。 

式1：8-oxodG 

ROS和自由基主要通过以下两条途径造成DNA氧化损伤：一是DNA链上的dG直接被氧化生成8-oxodG，二是核苷酸代谢池中的鸟嘌呤脱氧 核糖三磷酸(dGTP)被氧化为8-oxodGTP。8-oxodG可与腺嘌呤(A)错误配对，其效率几乎等同于与胞嘧啶(C)配对的效率，从而导致A:T→G:C和/或G:C→T:A的碱基颠换，这是活性氧引起DNA突变的理论基础。 

生物体内存在多种氧化修复酶，可将核苷酸代谢池中的8-oxodGTP降解为8-oxodGMP，使其在DNA复制时不能被利用。8-oxodGMP经过脱磷酸作用，最终以8-oxodG的形式释放到血液中呈现一种蓄积状态，8-oxodG在血液中半衰期较长，不会被进一步代谢，最终经尿液排出体外。因此，检测血浆或尿液中游离8-oxodG的含量可以反映DNA氧化损伤状态。 

目前国际上已有报道的8-oxodG的检测手段包括酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫组化法(IHC)、高效液相色谱-电化学法(HPLC-ECD)、气相色谱质谱法(GC-MS)、高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)。免疫学方法存在抗体特异性不强，检测结果假阳性率偏高，且检测灵敏度达不到临床要求等缺点。HPLC-ECD存在标本处理复杂，每个样品分析时间长等不足，而GC-MS在样品高温气化过程中容易引入人为氧化使结果假性增高。HPLC-MS/MS灵敏度高、结果准确可靠，每个样品分析时间短，从众多的检测方法中脱颖而出，成为8-oxodG检测的发展趋势。 

然而，因为8-oxodG在血液和尿液中的浓度很低，因此检测结果的准确性和精确度都不高。因此8-oxodG不适合单独作为评价老化程度的指标。 

RNA中的鸟苷(guanosine，G)同样易被氧化，其产物为8-oxoG(8-oxo-7，8-dihydroguanosine，见式2)。相对于DNA来说，RNA是单链核酸且无组蛋白的保护，同时RNA聚合酶缺乏校正功能，因此RNA更易被氧化。但是，由于RNA的变异并不遗传，因此，在过去的几十年，RNA氧化的研究并未受到足够的重视。因此，目前仍不清楚其氧化产物(8-oxoG)的生物学意义，仅仅是推测8-oxoG也与老化相关。 

式2：8-oxoG 

我国自2000年进入老龄化社会，老龄人口正以每年800万的速度递增，目前已达到1.5亿人，预计到2040年前后，老龄人口将达到4亿人的峰值，占届时总人口的31％左右。随着人口的老龄化，老年人的医疗保健和社会保障问题日渐突出，积极应对人口老龄化问题，对促进我国的可持续发展和社会稳定非常重要。然而，目前我国还没有一种快速、方便且廉价的方法或产品来评价老化的程度。 

因此，需要寻找一种更为敏锐有效便于检测的新的老化程度标志物和检测方法，以便更为有效地预测、预警与老化相关的疾病，使这些疾病能够在初期被发现从而及时有效地进行预防和治疗。 

发明内容

本发明一方面的目的是提供一种评价哺乳动物老化程度的试剂盒。 

本发明另一方面的目的是提供一种快速有效的评价哺乳动物老化程度的检测系统。 

本发明再一方面的目的是提供一种快速有效的评价哺乳动物老化程度的方法。 

本发明再一方面的目的是提供8-oxoG在评价哺乳动物老化程度中的应用。