[发明专利]利用酵母表面展示系统分析单抗的抗原表位的方法及其在疫苗开发中的应用无效
| 申请号： | 201110206801.X | 申请日： | 2011-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN102321146A | 公开（公告）日： | 2012-01-18 |
| 发明（设计）人： | 张林琦;史宣玲;左腾;汪桦;姚辰 | 申请（专利权）人： | 清华大学 |
| 主分类号： | C07K1/00 | 分类号： | C07K1/00;C12N15/11;C12N15/81;C12N1/19;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100084 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用酵母表面展示系统分析单抗表位的方法及其在疫苗开发中的应用。本发明提供的方法，包括如下步骤：(1)构建目的蛋白的DNA文库；(2)将DNA文库展示在酵母表面，得到酵母展示文库；(3)将目的蛋白的单抗与酵母展示文库甲混合，分选出与单抗结合的酵母；(4)将筛选出的酵母提取质粒进行测序，分析所述目的蛋白的抗原表位。同传统方法相比，本发明的优点：(1)酵母细胞对蛋白的修饰途径更多，可以展示大分子量和复杂蛋白；(2)酵母可采用FACS逐个筛选，提高准确性与筛选通量；(3)酵母可独立完成自身的生长复制过程，操作简便，干扰因素少；(4)酵母本身即为免疫佐剂，可检验抗原表位能否再诱导类似活性的抗体产生。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 酵母 表面 展示 系统分析 抗原 方法 及其 疫苗 开发 中的 应用 | ||
【主权项】：
分析目的蛋白的抗原表位的方法，包括如下步骤：(1)构建所述目的蛋白的DNA文库；所述DNA文库中，所述目的蛋白的编码基因的DNA片段插入T载体；所述T载体含有酵母a凝集素Aga2p的编码基因，且所述DNA片段编码的肽片段的N端与所述酵母a凝集素Aga2p的C端融合；(2)将所述DNA文库展示在酵母表面，得到酵母展示文库甲；(3)将所述目的蛋白的单克隆抗体与所述酵母展示文库甲混合，分选出与所述单克隆抗体结合的酵母；(4)将筛选出的酵母提取质粒进行测序，根据插入所述T载体的DNA片段的核苷酸序列分析所述目的蛋白的抗原表位。
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