[发明专利]神经干细胞培养扩增方法及所用培养基无效
| 申请号： | 201110173821.1 | 申请日： | 2011-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN102839154A | 公开（公告）日： | 2012-12-26 |
| 发明（设计）人： | 金宜强;刘军;杨立敏 | 申请（专利权）人： | 上海安集协康生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0797 | 分类号： | C12N5/0797 |
| 代理公司： | 北京永新同创知识产权代理有限公司 11376 | 代理人： | 程大军 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区张*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种神经干细胞培养扩增方法，包括将不同来源的神经干细胞用本发明所述培养液培养、添加营养补充液、更换新鲜培养液、挑选一定大小的神经球传代等步骤，还提供了相关的培养液、营养补充液等组合物的配方。本发明所述方法显著提高了静态培养下神经干细胞的增殖效率，并且不使用抗生素，成本较低，适合工业化生产。 | ||
| 搜索关键词： | 神经 干细胞 培养 扩增 方法 所用 培养基 | ||
【主权项】：
一种神经干细胞培养扩增方法，所述方法包括：(a)将神经干细胞接种在包含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的DMEM或DMEM/F12培养基中培养2、3或4天；(b)添加5‑20％体积的营养补充液并继续培养，其中所述营养补充液是包含1×B27添加剂，1×N2添加剂，1.0‑3.0mM的L‑谷氨酰胺，0.5‑1.5mM的丙酮酸钠，0.5‑1.5mM的N乙酰半胱氨酸(NAC)，50‑150ng/ml的bFGF，50‑150ng/ml的EGF以及1‑15ng/ml的白血病抑制因子(LIF)的DMEM或DMEM/F12培养基；(c)监测培养基中形成的神经球直径，当60％以上、优选70％以上神经球直径高于阈值时，分离直径高于所述阈值的神经球，消化后收获，其中所述阈值为200‑500μm，例如为250μm、300μm、350μm、400μm或450μm；(d)留在原培养基中的直径小于所述阈值的剩余细胞在将培养基移除1/2‑1/4体积并添加与移除体积相同体积的(a)中所述的包含bFGF和EGF的培养基后继续培养；(e)在(a)接种神经干细胞后第10、11、12、13、14或15天通过合并(c)收获的细胞和(d)继续培养所得的细胞而收获细胞。
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