[发明专利]一种用于病毒噬斑纯化和克隆混合胶溶液配制的新方法

摘要

本发明提供的一种用于病毒噬斑纯化和克隆混合胶溶液配制的新方法，其中1×细胞培养基的制备：由4-6克MEM干粉培养基，0.02-0.04克的L-谷氨酰氨，0.4-0.6克的水解乳蛋白，94-98ml注射用水和胎牛血清3-5ml混合均匀，pH值调至7.2-7.3备用；其中低熔点胶的制备：取0.6克的低熔点胶粉，倒入三角瓶中，加入40ml去离子水，将瓶口用硫酸纸和牛皮纸扎紧，在微波炉上煮沸4min，呈半固体状时备用；其中含1%的低熔点胶的混合胶溶液的制备与铺胶；用移液器将细胞板里的培养基吸尽，然后将制备的胶溶液吸出，沿培养板壁将胶缓缓铺在细胞表面，铺完后在室温放置10min使其充分凝固，然后放入37℃、5%的CO2培养箱中培养，观察细胞病变3-5天，挑取单个病毒克隆。该方法使常规的细胞数量提高了1.5倍，使单克隆病毒传3代后的毒价提高了8.6倍。

主权项

一种用于病毒噬斑纯化和克隆混合胶溶液配制的新方法，其特征在于：包括1×细胞培养基的制备、低熔点胶的制备、混合胶溶液的制备与铺胶；其中1×细胞培养基的制备：由4‑6克MEM干粉培养基，0.02‑0.04克的L‑谷氨酰氨，0.4‑0.6克的水解乳蛋白，94‑98ml注射用水和胎牛血清3‑5ml混合均匀，pH值调至7.2‑7.3备用；其中低熔点胶的制备：取0.6克的低熔点胶粉，倒入三角瓶中，加入40ml去离子水，将瓶口用硫酸纸和牛皮纸扎紧，在微波炉上煮沸4min，呈半固体状时备用；其中含1%的低熔点胶的混合胶溶液的制备与铺胶： 将上步的1×细胞培养基，加温38℃，取60ml与上步制备的全量低熔点胶混合均匀，用无菌的吸管轻轻吹打，使胶充分溶解并无气泡产生；取出预先制备好的培养成单层并接种产生细胞病变的病毒，即为原代细胞和传代细胞的细胞板；用移液器将细胞板里的培养基吸尽，然后将制备的胶溶液吸出，沿培养板壁将胶缓缓铺在细胞表面，铺完后在室温放置10min使其充分凝固，然后放入37℃、5%的CO2培养箱中培养，观察细胞病变3‑5天，挑取单个病毒克隆。