[发明专利]双温快循环荧光定量PCR端粒酶活性的检测方法和试剂盒

摘要

本发明涉及一种双温快循环荧光定量PCR端粒酶活性的检测方法和试剂盒。引物-锚定发夹引物(AHP)与复合式蝎形引物(DS)结合组成DS/AHP-TRAP体系，在双温快循环PCR条件下完成对永生化细胞蛋白提取液中端粒酶活性的检测。它是以含6个端粒重复序列的端粒酶延伸产物R6为定量标准物，绘制检测端粒酶延伸产物定量曲线。通过比较永生化细胞样品及R6的两组定量标准曲线，得到检测端粒酶活性定量曲线及端粒酶延伸产物定量曲线的吻合图。假设1个TPG值为1个永生化细胞产生的端粒酶延伸产物，确定TPG值代表R6的量。本发明的试剂盒可在荧光定量PCR仪上，更简便、更快捷、大批量地完成端粒酶活性的实时检测。在恶性肿瘤早期诊断及抗癌药物筛选方面具有广阔的前景。

主权项

一种双温快循环荧光定量PCR快速检测端粒酶活性的方法，其特征在于它包括如下步骤：1)永生化细胞蛋白提取液及人工合成端粒酶延伸产物定量标准溶液的制备；2)在荧光定量PCR仪上，将新型锚式发夹型引物与复合式蝎形引物结合，组成一个新的端粒重复序列扩增分析法体系，在双温快循环PCR扩增条件下，完成对细胞样品中端粒酶活性及标准溶液中端粒酶延伸产物的实时定量检测；3)根据实时扩增曲线，得到两组定量标准曲线，即检测端粒酶活性定量曲线和端粒酶延伸产物定量曲线，在这两组定量标准曲线吻合图上，得到以人工合成端粒酶延伸产物的总量，即TPG值表示细胞中端粒酶活性的定量方法。