[发明专利]一种从紫花苜蓿干草中制备纯多糖的方法

摘要

本发明涉及一种从紫花苜蓿干草中制备纯化多糖的方法，提供一种能规模化生产，工艺简单，成本低，效率高的制备苜蓿纯多糖的方法。将风干或烘干的苜蓿草粉碎，加入一定量的水浸泡，料水比为1：20-1:45，在240-400W功率40-60kHz的超声波作用下以55-85℃加热10-35min，过滤收集滤液。将得到的滤液浓缩至1/3体积，用按体积比1：4混合的正丁醇-三氯甲烷溶液除去蛋白，再加入2-4.5倍于原液的乙醇醇析，静置后于3000-5000rpm下离心10-20min，取下层沉淀，于-70~-50℃下冷冻干燥得粗多糖。再使用2种纤维素柱层析法分离纯化多糖，即得高纯度多糖组分。本方法与传统方法相比，降低了成本，而且大幅提高了产出效率，所得多糖产品，纯度可达96%以上。

主权项

一种从紫花苜蓿干草中制备纯多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）、将风干或烘干的苜蓿草粉碎，过60目筛，加入20‑35倍于草粉重量20‑40℃的温水浸泡30min；（2）、置于超声波提取器中，将温度升高到70‑80℃，以后保持恒温，开启超声波，于400W功率下，以60kHz超声波作用20‑30min，在此期间边加热边搅拌；作用后以真空泵抽滤，收集滤液，得多糖提取液；（3）、将提取液用旋转蒸发器在70‑90℃下浓缩至原体积的1/3，然后与等体积的正丁醇‑三氯甲烷溶液混合，于分液漏斗中剧烈震荡后静置30min，弃去下层液体，依据本步骤反复操作3次得纯化的多糖溶液；（4）、于上述所得多糖溶液中加入3‑4倍体积乙醇，待充分产生沉淀后，3000‑4000rpm下离心10‑15min，收集下层沉淀；将沉淀物以‑70~‑60℃于冻干机中冷冻干燥，即得多糖结晶，装入密封容器中保存备用；（5）、使用玻璃层析柱湿法装填Sephadex A‑25纤维素凝胶，装填高度35‑45cm，将整个系统用蒸馏水平衡24h，之后加入前述步骤制得的粗多糖，以蠕动恒流泵过柱，上样量：50‑150mg；洗脱速度：8‑12ml/h；依次用0.05‑0.15mol/L、0.2‑0.4 mol/L、0.45‑0.55 mol/L和0.6‑0.8 mol/L的NaCl溶液洗脱；四个浓度梯度依次收集50ml，75ml，75ml，50ml洗脱液；（6）、进一步纯化使用4组玻璃层析柱湿法装填Sephadex G‑200纤维素凝胶，装填高度35‑45cm，在加入样品前，将整个系统用蒸馏水平衡24h；4组玻璃层析柱中分别通入上述4组洗脱液，以蠕动恒流泵过柱，洗脱速度：4‑8ml/h；用0.1‑0.3mol/L的NaCl溶液洗脱；（7）、收集各Sephadex G‑200柱滤液于旋转蒸发器在70‑90℃下浓缩至原体积的1/3，分别加入3‑4倍体积乙醇，待充分产生沉淀后，3000‑4000rpm下离心10‑15min，收集下层沉淀；将沉淀物以‑70~‑60℃于冻干机中冷冻干燥，即得各组分纯多糖结晶。